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accure

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】原核表达，各位高手帮帮忙呀~

小弟我第一次做表达，做了两个月，最后终于得到了粗壮的蛋白带，可是还没有来得及高兴，发现蛋白大小和我预期的不一样，我的目的蛋白大小是47KD，加上载体蛋白33KD，得到的融合蛋白大小应该是在80左右，可是我的片段大小确显示在40，请帮我分析分析可能的原因！谢啦！！
PS:我用的载体是(PET42A,酶切位点Hind3，XholI)。
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1楼 2011-01-17 11:35:35
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
accure(金币+2): 谢谢，今天我就去测序！可是我看了，序列前面没有终止密码子呀。~ 2011-01-17 12:20:45
测序看看ORF是否正确，是不是翻译提前终止了。
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2楼2011-01-17 11:53:21
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)
accure(金币+4): 谢谢~我引物设计错了，移码了！唉。。。 2011-02-10 19:54:00
可能的话做个western吧。
1、突变的可能。
2、你可以google一下，网上很多关于42a表达GST标签断裂的问题。
3、如果没有特别的目的，建议你构建28a或32a的表达载体吧。带个HIS或TRX-HIS都可以。或者非融合表达也不错，不过纯化稍微复杂点。
http://a11712.accounting-degrees ... -b117-65-t-15412939
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3楼2011-01-17 12:26:10
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