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accure

金虫 (正式写手)


[交流] 【求助/交流】原核表达,各位高手帮帮忙呀~

小弟我第一次做表达,做了两个月,最后终于得到了粗壮的蛋白带,可是还没有来得及高兴,发现蛋白大小和我预期的不一样,我的目的蛋白大小是47KD,加上载体蛋白33KD,得到的融合蛋白大小应该是在80左右,可是我的片段大小确显示在40,请帮我分析分析可能的原因!谢啦!!
PS:我用的载体是(PET42A,酶切位点Hind3,XholI)。
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accure(金币+2): 谢谢,今天我就去测序!可是我看了,序列前面没有终止密码子呀。~ 2011-01-17 12:20:45
测序看看ORF是否正确,是不是翻译提前终止了。
2楼2011-01-17 11:53:21
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)


accure(金币+4): 谢谢~我引物设计错了,移码了!唉。。。 2011-02-10 19:54:00
可能的话做个western吧。
1、突变的可能。
2、你可以google一下,网上很多关于42a表达GST标签断裂的问题。
3、如果没有特别的目的,建议你构建28a或32a的表达载体吧。带个HIS或TRX-HIS都可以。或者非融合表达也不错,不过纯化稍微复杂点。
http://a11712.accounting-degrees ... -b117-65-t-15412939
3楼2011-01-17 12:26:10
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