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让心去散步

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[交流] 【求助/交流】关于5‘RACE，求助经验~ 已有9人参与

要克隆基因，拿到CDS的全长，老师让做5‘RACE，我是新手中的新手，请有经验的大虾们给我些指点吧~~
关于模板，关于体系，关于结果分析。。。。。。谢谢了~

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1楼 2011-01-11 11:38:08

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aaron2012

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1949stone(金币+1):谢谢交流 2011-01-11 12:10:42

先做5race,你是做已知基因吗
做基因引物最重要其他都还好

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2楼2011-01-11 11:48:03

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让心去散步

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Originally posted by aaron2012 at 2011-01-11 11:48:03:
先做5race,你是做已知基因吗
做基因引物最重要其他都还好

是一个已知基因，全长及CDS的序列都有的，因为有同学也做5‘RACE，做了8个月，而我只有1个半月左右的时间，所以很担心啊

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3楼2011-01-11 11:56:22

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aaron2012

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有序列了那我建议你好好学习一下引物的设计应该没有问题祝你好运

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生物，特别是分子生物，贵在坚持！

4楼2011-01-11 18:57:46

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gaoyang636

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还有就是模板要好，最好借师兄师姐的用。如果是你自己提RNA……就不好说了

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5楼2011-01-11 19:44:01

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Originally posted by gaoyang636 at 2011-01-11 19:44:01:
还有就是模板要好，最好借师兄师姐的用。如果是你自己提RNA……就不好说了

这个，我是开拓者，估计是师弟师妹用我的，另外，我提RNA是用OMEGA的试剂盒，质量应该没有问题，实验指导是个博士，可是因为太忙，没有时间指导我。。。杯具了

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6楼2011-02-15 20:12:09

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我是果果

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学习来了
我最近这几天也在做5'RACE,也都一直没出结果,烦死了

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7楼2011-02-15 20:29:02

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sthink

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不知道你用的是哪个试剂盒，我当初用的是TAKARA的，它对引物设计上有一定得要求，镁离子的浓度也很重要，低了就扩不出来。

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8楼2011-02-16 10:45:23

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江流

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引用回帖:

Originally posted by 让心去散步 at 2011-01-11 11:38:08:
要克隆基因，拿到CDS的全长，老师让做5‘RACE，我是新手中的新手，请有经验的大虾们给我些指点吧~~
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5‘RACE用GENE RACER这个盒子还是比较保险的，最关键的还是5’接头的连接，那几步一定要严格，其他的问题不大。

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江流天地外山色有无中

9楼2011-02-18 16:04:58

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cxt86

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lstt09nk(金币+2): 鼓励交流 2011-02-18 20:35:12

5‘RACE 我觉得试剂盒如果好的话其他的都可以很快学会以前用TAKARA的反复做了好久，后来换了clontech方便多了
模板很重要，RNA质量高，反转录严格操作，有助于获得好的模板
设计巢式引物可以同时设计2对引物，交叉组合可以有4种搭配，可以省钱。。。

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10楼2011-02-18 18:00:43

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