24小时热门版块排行榜    

查看: 749  |  回复: 5

clearth

至尊木虫 (正式写手)

专业智能视频监控、工业视觉

[交流] 【求助/交流】PCR有特异性条带,大家看看如何消除(附图)已有4人参与

这是我的放线菌V3片段的PCR电泳图,巣式PCR扩增,目标条带~210bp。第一轮是~1100bp的放线菌16S。主要问题是1.在~1100bp处有非特异性条带;2.有拖尾现象。

一开始我以为是模板浓度大, 后来改为0.25ul,仍然如此,请大家支支招吧

反应体系如下:


反应条件如下:



[ Last edited by clearth on 2010-12-30 at 14:29 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
呵呵,我个人的一点经验是:巢式PCR的时候,如果第一轮电泳就可以看到条带的话,第二轮P的时候,模板要上百倍稀释。
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2010-12-30 14:39:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

feng__

金虫 (著名写手)

雾~蝶


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
弱弱的说一句,延伸没必要那么久吧
会不会偶尔也会想起我....
3楼2010-12-30 14:40:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

在雨中

金虫 (著名写手)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2010-12-30 14:39:50:
呵呵,我个人的一点经验是:巢式PCR的时候,如果第一轮电泳就可以看到条带的话,第二轮P的时候,模板要上百倍稀释。

这个Brightfuture01是个大牛。哈哈。

把第一轮的产物多稀释下看看,还有延伸时间长了点吧?30s is OK。不过这个不是关键问题。
4楼2010-12-30 14:45:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 在雨中 at 2010-12-30 14:45:50:


这个Brightfuture01是个大牛。哈哈。

把第一轮的产物多稀释下看看,还有延伸时间长了点吧?30s is OK。不过这个不是关键问题。

呵呵,连小牛都算不上啊。做实验过程中碰壁太多了,所以了解的东西也就多了一些。
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
5楼2010-12-30 14:56:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

clearth

至尊木虫 (正式写手)

专业智能视频监控、工业视觉

引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2010-12-30 14:56:07:



呵呵,连小牛都算不上啊。做实验过程中碰壁太多了,所以了解的东西也就多了一些。

谢谢brightfuture01大牛先生,我现在就去试试,我的QQ是398545113,不知可否进一步交流。
6楼2010-12-30 15:08:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 clearth 的主题更新
普通表情 高级回复(可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[找工作] offer选择 +10 羡渔樵 2024-06-26 10/500 2024-06-27 12:19 by chenzhikai
[基金申请] 请问有知道博士后面上专家评审什么时候结束的么? +5 since—2010 2024-06-27 6/300 2024-06-27 12:15 by 王建邱1221
[基金申请] 请问三个字的中文名字,在文中到底怎么表示? 5+3 zhongyuan764 2024-06-22 7/350 2024-06-27 11:28 by f1yfish
[教师之家] 高校辞职,要求赔偿,这到底合不合理 +24 传动_海神 2024-06-23 36/1800 2024-06-27 11:26 by f1yfish
[论文投稿] 我在写关于多维空间的论文,希望能与大家交流,准备在science上发表 +9 lgf519 2024-06-24 11/550 2024-06-27 11:20 by f1yfish
[基金申请] 国基在研影响申请结果吗 +13 WOWO159357 2024-06-26 21/1050 2024-06-27 09:44 by WOWO159357
[基金申请] 博后网上办公系统维护 +14 取名字烦人 2024-06-25 22/1100 2024-06-26 22:15 by tuanbao2023
[有机交流] 有机物的酸酐如何准确表征 10+3 方酱 2024-06-24 7/350 2024-06-26 17:53 by 宁静远行
[基金申请] 国产期刊影响因子大于12的有20多个个了 +19 babu2015 2024-06-20 24/1200 2024-06-26 16:57 by deliciou
[教师之家] 神奇的中医 +8 水冰月月野兔 2024-06-24 10/500 2024-06-26 12:10 by lyfbangong
[有机交流] 过柱子,产品,杂质在是 pe:ea=100:1 也一起出来? +5 w256 2024-06-25 5/250 2024-06-26 09:31 by 小木木cc
[基金申请] 基金申请书名称有变化 +5 xuel2011 2024-06-25 7/350 2024-06-26 00:07 by 老虎当猫养
[考博] 没读上博,好焦虑! +6 wangzhe_bs 2024-06-24 8/400 2024-06-25 21:15 by wangzhe_bs
[有机交流] 对苯乙烯磺酰氯的合成机理 25+3 该死的科研 2024-06-24 5/250 2024-06-25 17:30 by 王学士
[基金申请] 演员杨幂在核心期刊发表论文,中国广播电视学期刊 +9 babu2015 2024-06-22 12/600 2024-06-25 11:05 by 我是勇敢牛牛
[金属] EBSD的解析率只有10% +3 wallace6666 2024-06-20 7/350 2024-06-24 16:52 by wallace6666
[金属] 寻找钛合金热压缩代做 +4 liuyang358 2024-06-23 4/200 2024-06-24 13:50 by 搬砖狗不放弃
[公派出国] 博士csc联培会看重第一学历学校层次吗 +4 也就这样 2024-06-23 4/200 2024-06-24 08:18 by 晓目崇
[博后之家] 在国内某高校做全职博士后2年,现在找到新的单位,出站或退站对新工作有什么影响? +10 nxplfcc 2024-06-20 10/500 2024-06-22 07:52 by 徐长安
[论文投稿] ACS 编辑的意见 10+3 哈哈妞1993 2024-06-20 3/150 2024-06-21 17:06 by 投个论文
信息提示
请填处理意见