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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】提取质粒
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wangdandelia

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】提取质粒 已有5人参与

大家提质粒后的浓度都是多少呢？
那次看到同学的都好几百ng/uL，而我提的一般都是30-60ng/uL，提过好几种质粒了，都是这样子。。。是我的实验操作有问题呢？还是质粒本来拷贝数就那么低呢？
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1楼 2010-12-27 20:28:51
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
rainwander(金币+1):鼓励积极参与~~~ 2010-12-27 21:53:36
有些质粒就这样子的
我提pcDNA可以超过1ug/ul，但是同样的操作对于psiCHECK-2质粒，顶多就300ng/ul，今天还遇到只有30ng/ul的情况
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2楼2010-12-27 20:45:29
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wangdandelia

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-12-27 20:45:29:
有些质粒就这样子的
我提pcDNA可以超过1ug/ul，但是同样的操作对于psiCHECK-2质粒，顶多就300ng/ul，今天还遇到只有30ng/ul的情况

哦 我提的都是平均水平30ng/ul,对我后来的酶切都很有影响，量太少了，看来下次需要大提了。。。
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3楼2010-12-27 20:52:39
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Arrennew

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+2):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-12-27 23:23:13
5ml-10ml菌，250ul,250ul,350ul, 试试。再不行就用氯霉素处理几个小时。
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生命不息，探索不止。
4楼2010-12-27 22:14:06
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sanmaoecho

金虫 (小有名气)
★ ★
scelab(金币+2):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-12-27 23:23:24
一般小提的试剂盒一个柱子可以提20-30ug，我就差不多这个量，还好，看师兄又可以一个柱子提到40-50ug的
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我们对於那份面向未来的勇气，过於渴求而被过去所迷惑
5楼2010-12-27 22:21:00
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wangdandelia

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by Arrennew at 2010-12-27 22:14:06:
5ml-10ml菌，250ul,250ul,350ul, 试试。再不行就用氯霉素处理几个小时。

用氯霉素处理有什么用呢？我的都是5mL的菌收集，直接用试剂盒提取质粒。。
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6楼2010-12-28 10:58:38
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wangdandelia

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by sanmaoecho at 2010-12-27 22:21:00:
一般小提的试剂盒一个柱子可以提20-30ug，我就差不多这个量，还好，看师兄又可以一个柱子提到40-50ug的

这是多少菌体可以收集的量呢？好多啊~！
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7楼2010-12-28 10:59:15
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sanmaoecho

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
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Originally posted by wangdandelia at 2010-12-28 10:59:15:

这是多少菌体可以收集的量呢？好多啊~！

5ml摇菌过夜，不过我估计我提的比他们低一点也有可能是我加了去蛋白液损失一点，他们一般提TOP10,DHa5就把这一步省了
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我们对於那份面向未来的勇气，过於渴求而被过去所迷惑
8楼2010-12-28 15:32:05
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Arrennew

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
氯霉素是一种蛋白质合成抑制剂，它不杀死活细胞，而是能够抑制染色体的复制，而不影响质粒的复制。这样经过氯霉素处理使得细胞内质粒得到高拷贝。google一下，快失传了，呵呵。
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生命不息，探索不止。
9楼2010-12-28 19:59:11
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tian1203

银虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
如果想要高浓度，用10ml或15ml菌液提，200转摇16小时没问题。裂解液那些多加些就是
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别紧张，我不是什么好人...
10楼2010-12-28 20:53:01
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