应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR产物的琼脂糖电泳图片
51/1返回列表
查看: 3569  |  回复: 27
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

hhb7610076

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】PCR产物的琼脂糖电泳图片



这是用3个DNA模板对14对SSR引物的PCR产物的电泳图。
用的是20微升的体系
buffer                   2微升
mg（2.5mM）     2微升
dDTP（2.5mM）  1.5微升
模板                     1微
引物（10um）     上游 1微升
                            下游 1微升
Taq                       1U

退火温度我用的温度范围

为什么同一引物有的出有的不出，麻烦大家帮看一下引物能用吗？
体系还有什么问题。谢谢了！


这是DNA的电泳图。

[ Last edited by hhb7610076 on 2010-12-21 at 09:39 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2010-12-19 20:29:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

silicare

荣誉版主 (文坛精英)
★
hhb7610076(金币+1):谢谢参与
建议每个模板重复三次
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2010-12-20 08:17:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 28 个回答

haitian0625

金虫 (小有名气)
★
hhb7610076(金币+1):谢谢参与
是否应该自己做一下小试，摸一下退火温度呢，合适的退火温度也是PCR的条件之一啊，合适了才可能清晰的，当然不要求产物浓度也无所谓。
不知你模板浓度有多少，模板有些少吧。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2010-12-19 20:48:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rioarsenal

金虫 (正式写手)
★
hhb7610076(金币+1):谢谢参与
这么多引物，首先应该用primer等软件看看是否符合做引物的条件，然后再选出合适的来做梯度PCR，确定比较合适的条件。

不知道楼主做这个实验的目的是什么
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2010-12-20 02:50:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rechkov

木虫 (正式写手)
★
hhb7610076(金币+1):谢谢参与
我的经验呢，DNA质量对引物的扩增效率是有很大影响的，所以在相通扩增条件下，三个DNA模板的扩增效果是有很大差异的。这里你只说模板是1微升，太不精细了，你应该首先给DNA定量，然后稀释到大约相同的浓度，做SSR一般50到100纳克DNA就够了，太多了有时反而扩增不出来。
赞一下(2人) 回复此楼
5楼2010-12-20 05:07:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 28 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭