应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR产物的琼脂糖电泳图片
281/1返回列表
查看: 4813  |  回复: 27
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

hhb7610076

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】PCR产物的琼脂糖电泳图片



这是用3个DNA模板对14对SSR引物的PCR产物的电泳图。
用的是20微升的体系
buffer                   2微升
mg（2.5mM）     2微升
dDTP（2.5mM）  1.5微升
模板                     1微
引物（10um）     上游 1微升
                            下游 1微升
Taq                       1U

退火温度我用的温度范围

为什么同一引物有的出有的不出，麻烦大家帮看一下引物能用吗？
体系还有什么问题。谢谢了！


这是DNA的电泳图。

[ Last edited by hhb7610076 on 2010-12-21 at 09:39 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2010-12-19 20:29:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

haitian0625

金虫 (小有名气)
★
hhb7610076(金币+1):谢谢参与
是否应该自己做一下小试，摸一下退火温度呢，合适的退火温度也是PCR的条件之一啊，合适了才可能清晰的，当然不要求产物浓度也无所谓。
不知你模板浓度有多少，模板有些少吧。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2010-12-19 20:48:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
★
hhb7610076(金币+1):谢谢参与
图呢楼主？
回复此楼
3楼2010-12-20 00:09:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rioarsenal

金虫 (正式写手)
★
hhb7610076(金币+1):谢谢参与
这么多引物，首先应该用primer等软件看看是否符合做引物的条件，然后再选出合适的来做梯度PCR，确定比较合适的条件。

不知道楼主做这个实验的目的是什么
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2010-12-20 02:50:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rechkov

木虫 (正式写手)
★
hhb7610076(金币+1):谢谢参与
我的经验呢，DNA质量对引物的扩增效率是有很大影响的，所以在相通扩增条件下，三个DNA模板的扩增效果是有很大差异的。这里你只说模板是1微升，太不精细了，你应该首先给DNA定量，然后稀释到大约相同的浓度，做SSR一般50到100纳克DNA就够了，太多了有时反而扩增不出来。
赞一下(2人) 回复此楼
5楼2010-12-20 05:07:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

silicare

荣誉版主 (文坛精英)
★
hhb7610076(金币+1):谢谢参与
建议每个模板重复三次
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2010-12-20 08:17:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hhb7610076

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by haitian0625 at 2010-12-19 20:48:11:
是否应该自己做一下小试，摸一下退火温度呢，合适的退火温度也是PCR的条件之一啊，合适了才可能清晰的，当然不要求产物浓度也无所谓。
不知你模板浓度有多少，模板有些少吧。

退火温度我用的是温度梯度  模板在50-100 ng之间
赞一下 回复此楼
7楼2010-12-20 12:28:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hhb7610076

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2010-12-20 00:09:40:
图呢楼主？

有啊
能看见的。。。
回复此楼
8楼2010-12-20 12:28:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hhb7610076

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by rioarsenal at 2010-12-20 02:50:04:
这么多引物，首先应该用primer等软件看看是否符合做引物的条件，然后再选出合适的来做梯度PCR，确定比较合适的条件。

不知道楼主做这个实验的目的是什么

引物是文献上查的，ssr 做遗传多样性的。 不知道产物浓度行不行？
赞一下 回复此楼
9楼2010-12-20 12:32:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hhb7610076

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by silicare at 2010-12-20 08:17:02:
建议每个模板重复三次

恩 谢谢
回复此楼
10楼2010-12-20 12:34:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hhb7610076

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by rechkov at 2010-12-20 05:07:37:
我的经验呢，DNA质量对引物的扩增效率是有很大影响的，所以在相通扩增条件下，三个DNA模板的扩增效果是有很大差异的。这里你只说模板是1微升，太不精细了，你应该首先给DNA定量，然后稀释到大约相同的浓度，做SSR ...

现在的产物浓度是不是有点低呢？  那是应该增加模板的量吗？
赞一下 回复此楼
11楼2010-12-20 12:37:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rioarsenal

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by hhb7610076 at 2010-12-20 12:32:34:


引物是文献上查的，ssr 做遗传多样性的。 不知道产物浓度行不行？

偶，楼主DNA的电泳图么，上来看看啊
赞一下 回复此楼
12楼2010-12-20 13:13:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

haitian0625

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by hhb7610076 at 2010-12-20 12:28:55:


有啊
能看见的。。。

我们实验室用很原始的377测序仪就能分型，这样的条带是可以的。
赞一下 回复此楼
13楼2010-12-20 13:47:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rechkov

木虫 (正式写手)
★
lstt09nk(金币+1):鼓励交流，欢迎常来 2010-12-20 17:06:13
引用回帖:
Originally posted by hhb7610076 at 2010-12-20 12:37:06:


现在的产物浓度是不是有点低呢？  那是应该增加模板的量吗？

产物浓度低并不一定是模板浓度低造成的，根据我的经验，有时候模板浓度过高反而会造成产量降低，所以还是建议你测一下模板浓度，或者做一个梯度试验，看看多大浓度才适合。
赞一下(1人) 回复此楼
14楼2010-12-20 16:41:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hhb7610076

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by rechkov at 2010-12-20 16:41:21:


产物浓度低并不一定是模板浓度低造成的，根据我的经验，有时候模板浓度过高反而会造成产量降低，所以还是建议你测一下模板浓度，或者做一个梯度试验，看看多大浓度才适合。

我测过一次浓度 好像是因为不纯 没测出准确的值。
赞一下 回复此楼
15楼2010-12-21 09:44:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hhb7610076

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by rioarsenal at 2010-12-20 13:13:24:



偶，楼主DNA的电泳图么，上来看看啊

图上了！
回复此楼
16楼2010-12-21 09:44:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rioarsenal

金虫 (正式写手)
★ ★
rainwander(金币+2):鼓励新虫积极参与~~~ 2010-12-22 08:11:35
引用回帖:
Originally posted by hhb7610076 at 2010-12-21 09:44:43:


图上了！

模板DNA质量一般，建议好好纯化下，然后适当增加模板用量
赞一下(1人) 回复此楼
17楼2010-12-22 05:26:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tanxi125

银虫 (小有名气)
★
hhb7610076(金币+1):谢谢参与
给我跑的一样，开始点样指点了5μl，现在我都点上了，才比较亮，你再多扩几次，越扩就越好，模板我的是1μg/μl的DNA母液，稀释十倍后，在20μl体系里面加入1μl。
赞一下(1人) 回复此楼
18楼2011-01-07 12:23:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wuw579

铁杆木虫 (正式写手)
★
hhb7610076(金币+1):谢谢参与
是啊   什么目的呢
回复此楼
19楼2011-01-17 21:30:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

千与千寻oO

铁虫 (小有名气)
★
hhb7610076(金币+1):谢谢参与
看了所有的回帖。感觉上应该是你的DNA的质量问题。如果条件允许的话，可以测下DNA的OD值。我也做多样性，一般浓度在100纳克左右。然后A260/280=1.8~2.0，A260/230＞2就说明DNA质量很好。
赞一下(1人) 回复此楼
20楼2011-04-01 13:15:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dingxiuying

木虫 (正式写手)
★
hhb7610076(金币+1):谢谢参与
我也在学习做ssr，楼主的pcr产物电泳图是不是表明特异性太差了，ssr引物扩增出的产物不应该有那么多条带吧？希望有经验的同行给做个指点。谢谢先。
赞一下(1人) 回复此楼
21楼2011-04-02 17:15:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

niuzheng

银虫 (小有名气)
★
hhb7610076(金币+1):谢谢参与
有没有人能把结果分析一下，不要讲那个退火温度。还有这个结果能简单的说明什么问题吗？
赞一下(1人) 回复此楼
22楼2011-10-23 18:56:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dingxiuying

木虫 (正式写手)
1、感觉DNA提的质量不好。
2、引物应该不会有问题，因为都是网上查到的现成的。
3、PCR产物的特异性不好，建议提高退火温度。
4、我用的模板是150ng，效果不错。
赞一下 回复此楼
23楼2011-10-24 09:03:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dingxiuying

木虫 (正式写手)
引用回帖:
22楼: Originally posted by niuzheng at 2011-10-23 18:56:19:
有没有人能把结果分析一下，不要讲那个退火温度。还有这个结果能简单的说明什么问题吗？

电泳的结果结合资料中PCR产物的长度可以大概判断出ssr引物是否具有多态性。但是PCR条件的优化是必须要做的，因为这是以后试验的基础。
赞一下 回复此楼
24楼2011-10-24 09:06:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wxq999

新虫 (小有名气)
西瓜:编辑内容 2011-10-24 17:49
-------------广告内容-----------------
该虫多次发布广告，为了避免版主刷管理记录的嫌疑，不再每个帖子单独扣分，而是分几次重罚。请自重，勿扰乱论坛的正常交流！

[ Last edited by 西瓜 on 2011-10-24 at 17:49 ]
赞一下 回复此楼
25楼2011-10-24 17:01:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冬天小和尚

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
三个DNA模板是来自同一个个体的吗？如果不是，那是会有差异的吧？
赞一下(1人) 回复此楼
26楼2011-12-12 15:21:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

btx362237729

金虫 (正式写手)
哇 好大的胶
回复此楼
27楼2011-12-13 01:39:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
三吉之一28楼
2013-09-12 10:47   回复  
相关版块跳转 我要订阅楼主 hhb7610076 的主题更新
281/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 今天务委会开完了，明天出结果吗 +7 angus9576 2026-08-25 7/350 2026-08-25 15:50 by Weed114114
[基金申请] 今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +17 医学老男孩 2026-08-20 22/1100 2026-08-25 15:36 by 医学老男孩
[基金申请] 什么时候开奖？ +12 CrisMessi 2026-08-18 13/650 2026-08-25 14:40 by ZJTJZ
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
[教师之家] 导师吐槽：我怎么摊上了这么个极品研究生！ +3 苏东坡二世 2026-08-23 3/150 2026-08-25 10:35 by shisan1313
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +5 process2012 2026-08-23 7/350 2026-08-25 09:42 by huixian257
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +17 kkkl_v 2026-08-19 18/900 2026-08-25 09:41 by windflowerwy
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +7 炎黄贵胄 2026-08-22 8/400 2026-08-25 08:48 by ZJTJZ
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +25 yaoyewhu2008 2026-08-20 27/1350 2026-08-25 08:01 by Equinoxhua
[基金申请] 明天应该可查了！？ +5 chengyan1220 2026-08-23 5/250 2026-08-24 23:28 by 我4大白菜
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +21 koalala 2026-08-24 24/1200 2026-08-24 19:25 by 家与远方
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +14 ziyangfang 2026-08-19 17/850 2026-08-24 18:37 by 哈哈蛤？
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +13 kulium 2026-08-21 16/800 2026-08-24 16:27 by superceng
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +13 大萍1987 2026-08-20 16/800 2026-08-24 10:23 by 太傻了
[基金申请] 科研孤儿太难了 +18 我4大白菜 2026-08-20 19/950 2026-08-24 09:47 by 凯恩广盛催化分�
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 今天放榜吗？ +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭