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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】trizol 提ＲＮＡ中的一些问题
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oditors

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】trizol 提ＲＮＡ中的一些问题 已有17人参与

小弟要用Trizol提RNA，但是一直都提不好。查一些资料，总结出下面一下问题，希望大虾们给我解说一下！！！
1、提RNA过程中，那个异丙醇的量以什么为标准？我现在是定500ul。异丙醇需要预冷吗？常温下用影响大吗？我一直都是常温提的。
2、洗涤沉淀后，在空气干燥时，一般干燥多久啊？我有试过30分钟，也试过几分钟，但是最后复溶的效果都不好，浓度都偏低，而且30分钟时，原来明显的白色沉淀会溶解不见。
3、我提RNA的浓度一直都不好，有什么办法能够把浓度提上去啊！
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1楼 2010-11-23 16:41:33
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

sxxuan

金虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★
dhd997(金币+2):谢谢交流 2010-11-25 10:29:15
lstt09nk(金币+2):辛苦 2010-11-26 09:34:59
提取RNA时，异丙醇和洗涤用的乙醇都是预冷的
离心时也是4度防止降解
干燥3-5min就差不多了
操作的时候要戴手套，不能碰到EP管的管壁。
用到的EP管枪头等，最好用DEPC处理，实在不行，灭菌久一点也可以的
祝实验顺利
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你的日子如何，你的力量也必如何！
5楼2010-11-25 10:26:02
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zuodongyun

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+2):鼓励交流 2010-11-26 08:20:07
异丙醇是0.8体积，最好是预冷的
最后倒掉70%乙醇后，短暂离心，用枪吸去余液，干燥5分钟左右就可以了
最后只用20微升水溶就可以了
浓度低可能与你所提取的材料有关系
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10楼2010-11-25 19:46:53
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liyong1981

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):鼓励交流 2010-11-23 18:36:07
1..异丙醇需要预冷,你应该知道为什么，冷的才容易沉淀~
2。不要过度干燥，和DNA一样，太干了不容易溶解
3。上面两点做好了，你浓度就上去了~
祝 你成功！
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2楼2010-11-23 17:32:58
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普通回帖

zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):感谢补充 2010-11-23 18:37:51
引用回帖:
Originally posted by liyong1981 at 2010-11-23 17:32:58:
1..异丙醇需要预冷,你应该知道为什么，冷的才容易沉淀~
2。不要过度干燥，和DNA一样，太干了不容易溶解
3。上面两点做好了，你浓度就上去了~
祝 你成功！

如果浓度偏低，出去提取的量有点少以外，还有可能污染了RNase，导致RNA的降解造成的。所以在整个操作过程中应该避免污染，防止皮肤和空气颗粒上的RNase污染。
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我有一个梦想，我梦想有一天，我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力，居住在自己愿意居住的地方。
3楼2010-11-23 18:02:19
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tiani_tan

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
浓度低与你溶解的量有关，
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4楼2010-11-23 20:41:08
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phyllislhy

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
实验前认真看试剂说明书，上面如何加溶液如何配比写得都很清楚
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6楼2010-11-25 11:01:56
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oditors

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by zhaohq1209 at 2010-11-23 18:02:19:

如果浓度偏低，出去提取的量有点少以外，还有可能污染了RNase，导致RNA的降解造成的。所以在整个操作过程中应该避免污染，防止皮肤和空气颗粒上的RNase污染。

恩恩
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7楼2010-11-25 18:18:44
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oditors

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by sxxuan at 2010-11-25 10:26:02:
提取RNA时，异丙醇和洗涤用的乙醇都是预冷的
离心时也是4度防止降解
干燥3-5min就差不多了
操作的时候要戴手套，不能碰到EP管的管壁。
用到的EP管枪头等，最好用DEPC处理，实在不行，灭菌久一点也可以的
祝实 ...

恩恩，谢谢
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8楼2010-11-25 18:19:00
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oditors

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by phyllislhy at 2010-11-25 11:01:56:
实验前认真看试剂说明书，上面如何加溶液如何配比写得都很清楚

恩恩，好，
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9楼2010-11-25 18:19:15
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