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【求助/交流】trizol 提RNA中的一些问题
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oditors
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[交流]
【求助/交流】trizol 提RNA中的一些问题
已有17人参与
小弟要用Trizol提RNA,但是一直都提不好。查一些资料,总结出下面一下问题,希望大虾们给我解说一下!!!
1、提RNA过程中,那个异丙醇的量以什么为标准?我现在是定500ul。异丙醇需要预冷吗?常温下用影响大吗?我一直都是常温提的。
2、洗涤沉淀后,在空气干燥时,一般干燥多久啊?我有试过30分钟,也试过几分钟,但是最后复溶的效果都不好,浓度都偏低,而且30分钟时,原来明显的白色沉淀会溶解不见。
3、我提RNA的浓度一直都不好,有什么办法能够把浓度提上去啊!
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1楼
2010-11-23 16:41:33
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zuodongyun
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dhd997(金币+2):鼓励交流 2010-11-26 08:20:07
异丙醇是0.8体积,最好是预冷的
最后倒掉70%乙醇后,短暂离心,用枪吸去余液,干燥5分钟左右就可以了
最后只用20微升水溶就可以了
浓度低可能与你所提取的材料有关系
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10楼
2010-11-25 19:46:53
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liyong1981
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lstt09nk(金币+1):鼓励交流 2010-11-23 18:36:07
1..异丙醇需要预冷,你应该知道为什么,冷的才容易沉淀~
2。不要过度干燥,和DNA一样,太干了不容易溶解
3。上面两点做好了,你浓度就上去了~
祝 你成功!
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2楼
2010-11-23 17:32:58
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zhaohq1209
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lstt09nk(金币+1):感谢补充 2010-11-23 18:37:51
引用回帖:
Originally posted by
liyong1981
at 2010-11-23 17:32:58:
1..异丙醇需要预冷,你应该知道为什么,冷的才容易沉淀~
2。不要过度干燥,和DNA一样,太干了不容易溶解
3。上面两点做好了,你浓度就上去了~
祝 你成功!
如果浓度偏低,出去提取的量有点少以外,还有可能污染了RNase,导致RNA的降解造成的。所以在整个操作过程中应该避免污染,防止皮肤和空气颗粒上的RNase污染。
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我有一个梦想,我梦想有一天,我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力,居住在自己愿意居住的地方。
3楼
2010-11-23 18:02:19
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tiani_tan
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):给个红包,谢谢回帖交流
浓度低与你溶解的量有关,
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4楼
2010-11-23 20:41:08
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