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oditors

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】trizol 提RNA中的一些问题 已有17人参与

小弟要用Trizol提RNA,但是一直都提不好。查一些资料,总结出下面一下问题,希望大虾们给我解说一下!!!
1、提RNA过程中,那个异丙醇的量以什么为标准?我现在是定500ul。异丙醇需要预冷吗?常温下用影响大吗?我一直都是常温提的。
2、洗涤沉淀后,在空气干燥时,一般干燥多久啊?我有试过30分钟,也试过几分钟,但是最后复溶的效果都不好,浓度都偏低,而且30分钟时,原来明显的白色沉淀会溶解不见。
3、我提RNA的浓度一直都不好,有什么办法能够把浓度提上去啊!
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sxxuan

金虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★
dhd997(金币+2):谢谢交流 2010-11-25 10:29:15
lstt09nk(金币+2):辛苦 2010-11-26 09:34:59
提取RNA时,异丙醇和洗涤用的乙醇都是预冷的
离心时也是4度防止降解
干燥3-5min就差不多了
操作的时候要戴手套,不能碰到EP管的管壁。
用到的EP管枪头等,最好用DEPC处理,实在不行,灭菌久一点也可以的
祝实验顺利
你的日子如何,你的力量也必如何!
5楼2010-11-25 10:26:02
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liyong1981

金虫 (正式写手)


★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):鼓励交流 2010-11-23 18:36:07
1..异丙醇需要预冷,你应该知道为什么,冷的才容易沉淀~
2。不要过度干燥,和DNA一样,太干了不容易溶解
3。上面两点做好了,你浓度就上去了~
祝 你成功!
2楼2010-11-23 17:32:58
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zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):感谢补充 2010-11-23 18:37:51
引用回帖:
Originally posted by liyong1981 at 2010-11-23 17:32:58:
1..异丙醇需要预冷,你应该知道为什么,冷的才容易沉淀~
2。不要过度干燥,和DNA一样,太干了不容易溶解
3。上面两点做好了,你浓度就上去了~
祝 你成功!

如果浓度偏低,出去提取的量有点少以外,还有可能污染了RNase,导致RNA的降解造成的。所以在整个操作过程中应该避免污染,防止皮肤和空气颗粒上的RNase污染。
我有一个梦想,我梦想有一天,我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力,居住在自己愿意居住的地方。
3楼2010-11-23 18:02:19
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tiani_tan

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
浓度低与你溶解的量有关,
4楼2010-11-23 20:41:08
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