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lilirong2009

铜虫 (小有名气)

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[交流] 【求助/交流】PCR得到几条带，怎么办

我自己设计了几种引物，目的是从金黄色葡萄球菌总DNA调取其中一段二三百bp左右的基因片段。做了touchdownPCR后,其中一种引物PCR后得到了两个条带，一条>500bp,一条300bp左右（图1中1、2）；还有一种引物得到三个条带（图1中3、4），是什么原因呢？然后我将这几个条带分别挖胶，将得到的胶F分别加入PCR管中作为模板再进行PCR，但是得到的电泳图像却与之前的相似（图2），我不能理解为什么挖胶得到的较小片段PCR后仍能得到较大的片段（图2中泳道1、2、3、4），剩余几个挖胶条带PCR后得到的是一片亮光？还有我设计的引物为什么会得到2个和3个条带啊？有什么好办法解决？
图1：

图2：

多谢指教!!!

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1楼2010-11-19 14:53:56

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傻子

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lstt09nk(金币+1):鼓励交流 2010-11-22 10:49:10

做梯度PCR优化退火温度，同时考虑用hot-star taq酶实验。适当降低模板和引物的浓度。如果都不行，换引物吧

赞一下(1人)

5楼2010-11-22 09:46:23

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