24小时热门版块排行榜    

查看: 1394  |  回复: 4

lilirong2009

铜虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】PCR得到几条带,怎么办

我自己设计了几种引物,目的是从金黄色葡萄球菌总DNA调取其中一段二三百bp左右的基因片段。做了touchdownPCR后,其中一种引物PCR后得到了两个条带,一条>500bp,一条300bp左右(图1中1、2);还有一种引物得到三个条带(图1中3、4),是什么原因呢 ?然后我将这几个条带分别挖胶,将得到的胶F分别加入PCR管中作为模板再进行PCR,但是得到的电泳图像却与之前的相似(图2),我不能理解为什么挖胶得到的较小片段PCR后仍能得到较大的片段(图2中泳道1、2、3、4) ,剩余几个挖胶条带PCR后得到的是一片亮光?还有我设计的引物为什么会得到2个和3个条带啊?有什么好办法解决?
图1:
图2:
  
    多谢指教!!!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
★ ★
lstt09nk(金币+2):鼓励交流 2010-11-19 17:38:23
引物的特异性不够,不妨将两条带都回收,然后连T测序,反正就几十块钱。

不知道你的胶回收产物做模板的时候稀释了没有,要是不稀释加上你的引物特异性不够的话,是会smear的。
2楼2010-11-19 17:07:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zgb1982

木虫 (正式写手)


最下面那条应该是引物二聚体吧。出现两面条带应该是引物特异性问题,提高退火温度试试撒。不懂乱说的
3楼2010-11-19 17:19:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yade

新虫 (小有名气)


很多PCR都会出现这种情况,一个是提高退火温度试试,另外可以尝试把TD-PCR改为普通PCR。
4楼2010-11-21 12:33:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

傻子

木虫 (正式写手)



lstt09nk(金币+1):鼓励交流 2010-11-22 10:49:10
做梯度PCR优化退火温度,同时考虑用hot-star taq酶实验。适当降低模板和引物的浓度。如果都不行,换引物吧
5楼2010-11-22 09:46:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lilirong2009 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 wsYGJnURYvm6 2026-08-31 3/150 2026-09-01 01:52 by o3EMxHUAQDtS
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 wsYGJnURYvm6 2026-08-31 3/150 2026-09-01 01:40 by o3EMxHUAQDtS
[公派出国] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 EZ67DG6CvcKL 2026-08-31 4/200 2026-09-01 01:30 by o3EMxHUAQDtS
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 EZ67DG6CvcKL 2026-08-31 4/200 2026-09-01 01:30 by o3EMxHUAQDtS
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +6 叶九微 2026-08-26 6/300 2026-08-31 23:54 by yudaoqian88
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的? +17 爱看书的可乐 2026-08-26 19/950 2026-08-31 21:30 by xiangy672
[基金申请] 面上意见出来了 +12 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 23/1150 2026-08-31 18:57 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 为什么到现在没收到通知? +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +6 gdd2018 2026-08-28 11/550 2026-08-30 08:58 by 超级无敌华子
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高,自己申请怎么就这么难 +12 Kittylucky 2026-08-27 13/650 2026-08-29 00:04 by superceng
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候,我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 某些机构,以效率低为荣,以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
信息提示
请填处理意见