24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 3044  |  回复: 15
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

kakaqa

铜虫 (初入文坛)


[交流] 【求助/交流】请教3000bp的条带的连接问题

我克隆基因扩增得到了一个3000bp的片段,现在问题来了,我们实验室只有pMD18-T这种载体,听说这种载体连接3000bp的片段有点难度,但也能连上,请教用这种载体连过3000bp条带的高手,连接体系是怎样的,多少度需要连接多久,我已经做了3次了,结果都是失败,相当的郁闷啊!!!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

» 抢金币啦!回帖就可以得到:

查看全部散金贴

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zgb1982

木虫 (正式写手)


单纯从连接上讲,不算难连吧,我连过4.3Kb的,4度过夜,10ul体系,测序了,不过存在突变位点。
9楼2010-11-13 22:06:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 16 个回答

jackiechubut

木虫 (小有名气)


2200左右的倒是连过,不过没用这个T载体,实在连不上你可以考虑购买其他的T载体连接下。
2楼2010-11-11 21:10:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)



amisking(金币+1):鼓励交流! 2010-11-11 21:45:09
3kb有点大,你是用普通TAQ做的吗?最好用高保真酶把产物纯化后再加普通TAQ跟dNTPs 72度半小时,再连pMD18-T 16度反应五六个小时。我实验室有这么做的结果不错。希望你成功。
3楼2010-11-11 21:16:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kakaqa

铜虫 (初入文坛)


引用回帖:
Originally posted by lvbobo823 at 2010-11-11 21:16:30:
3kb有点大,你是用普通TAQ做的吗?最好用高保真酶把产物纯化后再加普通TAQ跟dNTPs 72度半小时,再连pMD18-T 16度反应五六个小时。我实验室有这么做的结果不错。希望你成功。

我是用TAKARA的EXtaq做的,连了好多次都连不上,回收的条带很亮,但就是连接不上,真是郁闷死了,我是连接过夜的,现在又做了一次,希望能成功。哎,没办法,就碰运气了,载体本身只有2.7kb,希望这次运气不错。
4楼2010-11-12 08:18:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 国自然面上和省基金B类撒花 +17 花田半亩~白 2026-04-21 17/850 2026-04-23 07:30 by john198197
[考研] 有没有学校收留 +3 蒋昌鹏qtj 2026-04-20 3/150 2026-04-22 20:25 by 学员JpLReM
[考研] 312求调剂 +3 山河似你温柔 2026-04-22 3/150 2026-04-22 20:17 by 学员JpLReM
[考博] 华师大读博 +3 xq83 2026-04-22 5/250 2026-04-22 10:42 by xq83
[教师之家] 又一批高校组建人工智能学院 师资行吗 不是骗人吗 +5 yexuqing 2026-04-19 5/250 2026-04-22 10:01 by easeheart
[论文投稿] 急需审稿人!!! +3 陆小果画大饼 2026-04-21 3/150 2026-04-21 23:54 by jzy_123456
[考博] 申博/考博 +4 啃面包的小书虫 2026-04-17 8/400 2026-04-21 16:26 by 啃面包的小书虫
[考研] 295分求调剂 +6 ?要上岸? 2026-04-17 6/300 2026-04-21 08:18 by Equinoxhua
[考研] 337求调剂 +3 jyz04 2026-04-18 3/150 2026-04-20 12:24 by 研可安
[考博] 申博 +3 Xyyx. 2026-04-18 3/150 2026-04-20 10:44 by YuY66
[考博] 湖南大学刘巧玲课题组2026年第二批次博士研究生招生信息 +3 南风观火 2026-04-18 5/250 2026-04-20 10:13 by 南风观火
[考研] 294求调剂 +8 淡然654321 2026-04-17 9/450 2026-04-19 19:51 by Equinoxhua
[考研] 304求调剂 +8 castLight 2026-04-16 8/400 2026-04-19 17:14 by 中豫男
[考研] 求调剂 +10 小聂爱学习 2026-04-16 12/600 2026-04-19 16:51 by 中豫男
[考研] 求调剂 +6 苦命人。。。 2026-04-18 7/350 2026-04-19 16:27 by 中豫男
[考研] 接受任何调剂 +6 也就是栗子 2026-04-17 7/350 2026-04-18 17:20 by 涵竹刘
[考研] 收到复试调剂但是去不了 +8 小蜗牛* 2026-04-16 8/400 2026-04-18 11:15 by zixin2025
[考研] 260求调剂 +4 Zyt1314520.. 2026-04-17 5/250 2026-04-18 08:28 by babysonlkd
[有机交流] 二苯甲酮酸类衍生物 50+3 小白爱主人 2026-04-17 6/300 2026-04-17 18:47 by kf2781974
[考研] 322求调剂 +6 tekuzu 2026-04-17 6/300 2026-04-17 13:48 by Espannnnnol
信息提示
请填处理意见