| 查看: 3665 | 回复: 15 | |||
gdongli8325铁杆木虫 (正式写手)
|
[交流]
【求助/交流】PCR产物A加尾
|
| 我是用Phusion 高保真酶做的PCR，但所用的载体是TA载体，所以需要A加尾。第一次我是这样做的：先用试剂盒将PCR产物纯化，然后加buffer, Taq, dATP，但是没有加上。后来分析可能是保真酶的内切酶活性还存在，于是就用酚、氯仿 将PCR 纯化，然后进行A加尾，但还是失败了。本来以为这是很简单的事情，但折腾了很久了。所以在此请教大家：究竟怎么样才能加上A尾巴？是否有既可以加上A又具有保真性的酶呢？因为要构建超表达载体，所以必须是保真的。 |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有202人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- TA cloning问题
已经有4人回复
- 天根公司的Long Taq DNA Polymerase的PCR扩增产物是平末端还是带A尾巴？
已经有8人回复
- 重叠延伸 ，为什么用连接后的片段作为模板却扩不出来？
已经有12人回复
- 求助各位虫友--去除PCR产物中的3‘端A尾
已经有10人回复
- 关于PCR产物与pMD 19Tsimple连接的问题
已经有19人回复
- 【求助/交流】PCR产物切胶回收后可不可以加A尾,做TA克隆，急！希望高手们能帮帮忙！
已经有9人回复
- 【求助/交流】pfu扩出的片段回收后怎么加A
已经有12人回复
- 【专题】PCR实验技术指南
已经有535人回复
anlewo7777
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 5
- 应助: 12 (小学生)
- 金币: 1786.8
- 散金: 7
- 红花: 3
- 帖子: 341
- 在线: 108.3小时
- 虫号: 314883
- 注册: 2007-02-25
- 性别: GG
- 专业: 微生物
2楼2010-11-03 07:27:00
3楼2010-11-03 07:51:17
lixg
铁杆木虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 61 (初中生)
- 金币: 7627.1
- 散金: 1
- 红花: 7
- 帖子: 591
- 在线: 106.4小时
- 虫号: 859417
- 注册: 2009-09-29
- 专业: 发育生物学
4楼2010-11-03 08:42:35
lxj341401
至尊木虫 (著名写手)
- MolEPI: 58
- 应助: 388 (硕士)
- 贵宾: 0.238
- 金币: 17138.7
- 红花: 43
- 帖子: 2251
- 在线: 712.4小时
- 虫号: 111074
- 注册: 2005-11-20
- 专业: 生物化学
5楼2010-11-03 08:56:01
三磷酸腺苷
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 7
- 应助: 1 (幼儿园)
- 贵宾: 0.021
- 金币: 7298.5
- 散金: 9
- 红花: 13
- 帖子: 4032
- 在线: 224.7小时
- 虫号: 551611
- 注册: 2008-04-27
- 性别: GG
- 专业: 神经系统肿瘤（含特殊感受
6楼2010-11-03 09:31:12
liyong1981 
金虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 774.1
- 散金: 116
- 帖子: 905
- 在线: 35.2小时
- 虫号: 357405
- 注册: 2007-04-27
- 性别: GG
- 专业: antibody
7楼2010-11-03 09:43:21
8楼2010-11-03 10:15:11
空谷幽风
金虫 (正式写手)
- MolEPI: 32
- 应助: 13 (小学生)
- 贵宾: 0.05
- 金币: 1106.1
- 散金: 500
- 红花: 13
- 帖子: 615
- 在线: 116.5小时
- 虫号: 714271
- 注册: 2009-03-04
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
9楼2010-11-03 11:04:36
silicare
荣誉版主 (文坛精英)
合伙创业版兼职版主
- MolEPI: 1
- 应助: 88 (初中生)
- 贵宾: 29.823
- 金币: 18946.3
- 散金: 24272
- 红花: 300
- 沙发: 88
- 帖子: 10222
- 在线: 1602.6小时
- 虫号: 948825
- 注册: 2010-01-26
- 专业: 摩尼教
- 管辖: 新药研发
10楼2010-11-03 12:33:57
