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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR产物A加尾
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lixg

铁杆木虫 (正式写手)
gdongli8325(金币+1): 2010-11-15 16:36:14
fermentas 的 pJET1.2 载体为平末端克隆载体，我们用NEB公司的Phusion 高保真酶扩增后，PCR产物直接连到 pJET1.2 载体，效率很高，且不用加A。不妨试试。
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11楼2010-11-15 08:20:09
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amilie030312

金虫 (正式写手)
gdongli8325(金币+1): 2010-11-15 16:36:19
只有有校正能力的酶才叫高保真酶，有校正能力的酶都是3‘平末端的，如果要连到T载体里面一定要加A。只要像2楼说的那样加肯定没问题，只要Taq酶没问题切ATP/NTP酶问题就行，ATP看看是不是放太久了，半年以内吧，超过了都不太好。片段如果太长的话加起来有些困难，但也能加上
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12楼2010-11-15 10:27:39
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王小义

禁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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13楼2012-12-15 22:24:49
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gdongli8325

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
2415611楼: Originally posted by 王小义 at 2012-12-15 22:24:49
各位好：我现在用到TAKARA的primerstarHS高保真酶，遇到个问题：高保真酶做PCR不用设置预变性的温度和时间吗？直接从变性开始吗？用这个酶，它的反应条件是按照推荐的做，还是用自己的退火温度做？如果是按照推荐的 ...

i did not use primerstarHS enzyme. I used phusion and PCR condition was following the recommendation from the kit.
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14楼2012-12-15 22:41:25
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冉冉89

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
11楼: Originally posted by lixg at 2010-11-15 08:20:09
fermentas 的 pJET1.2 载体为平末端克隆载体，我们用NEB公司的Phusion 高保真酶扩增后，PCR产物直接连到 pJET1.2 载体，效率很高，且不用加A。不妨试试。

你好
请问你在用fermentas 的 pJET1.2 载体克隆时，你的目的片段有多大？
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15楼2015-05-12 21:32:59
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冉冉89

新虫 (初入文坛)
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引用回帖:
8楼: Originally posted by xulanzzz at 2010-11-03 10:15:11
呵呵 我们现在用的T载体不需要A尾巴，直接用KOD酶进行PCR，PCR产物直接进行T载体连接就可以。pBM19-B载体就可以实现平末端直接连接，可以买这个试试。

你好
请问你用的pBM19-B载体是哪家生物公司生产的？
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16楼2015-05-12 21:44:41
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