应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR产物A加尾
162/2返回列表上一页12
查看: 3781  |  回复: 15
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

lixg

铁杆木虫 (正式写手)
gdongli8325(金币+1): 2010-11-15 16:36:14
fermentas 的 pJET1.2 载体为平末端克隆载体，我们用NEB公司的Phusion 高保真酶扩增后，PCR产物直接连到 pJET1.2 载体，效率很高，且不用加A。不妨试试。
赞一下 回复此楼
11楼2010-11-15 08:20:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

amilie030312

金虫 (正式写手)
gdongli8325(金币+1): 2010-11-15 16:36:19
只有有校正能力的酶才叫高保真酶，有校正能力的酶都是3‘平末端的，如果要连到T载体里面一定要加A。只要像2楼说的那样加肯定没问题，只要Taq酶没问题切ATP/NTP酶问题就行，ATP看看是不是放太久了，半年以内吧，超过了都不太好。片段如果太长的话加起来有些困难，但也能加上
赞一下 回复此楼
12楼2010-11-15 10:27:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王小义

禁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
13楼2012-12-15 22:24:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gdongli8325

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
2415611楼: Originally posted by 王小义 at 2012-12-15 22:24:49
各位好：我现在用到TAKARA的primerstarHS高保真酶，遇到个问题：高保真酶做PCR不用设置预变性的温度和时间吗？直接从变性开始吗？用这个酶，它的反应条件是按照推荐的做，还是用自己的退火温度做？如果是按照推荐的 ...

i did not use primerstarHS enzyme. I used phusion and PCR condition was following the recommendation from the kit.
赞一下 回复此楼
14楼2012-12-15 22:41:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冉冉89

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
11楼: Originally posted by lixg at 2010-11-15 08:20:09
fermentas 的 pJET1.2 载体为平末端克隆载体，我们用NEB公司的Phusion 高保真酶扩增后，PCR产物直接连到 pJET1.2 载体，效率很高，且不用加A。不妨试试。

你好
请问你在用fermentas 的 pJET1.2 载体克隆时，你的目的片段有多大？
赞一下 回复此楼
15楼2015-05-12 21:32:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冉冉89

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by xulanzzz at 2010-11-03 10:15:11
呵呵 我们现在用的T载体不需要A尾巴，直接用KOD酶进行PCR，PCR产物直接进行T载体连接就可以。pBM19-B载体就可以实现平末端直接连接，可以买这个试试。

你好
请问你用的pBM19-B载体是哪家生物公司生产的？
赞一下 回复此楼
16楼2015-05-12 21:44:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 gdongli8325 的主题更新
162/2返回列表上一页12
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 极限拉扯，如何抉择 +11 Isak0320 2026-10-12 15/750 2026-10-14 21:55 by 猫鱼不是鱼
[基金申请] 申请科研项目纯靠实力能成功吗？ 200+5 David1982 2026-10-13 8/400 2026-10-14 21:38 by lhw_GPA4.0
[硕博家园] 中科院海洋所招收海洋材料相关领域博士研究生及研究助理 +3 sujiner 2026-10-08 4/200 2026-10-14 20:40 by qicaiyun
[职场人生] 40+中年人失业后，还能找到好工作吗？ +3 xqy2009 2026-10-13 3/150 2026-10-14 20:17 by 43358052
[教师之家] 课题组会帮你通过考核么？ +4 好运来～9527 2026-10-10 7/350 2026-10-13 08:41 by xli1984
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:34 by XQNyDCa1Tk5n
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:15 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 22:11 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 14:25 by VOMexwnDzOFZ
[教师之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 (EPI+-1)(金币-50) +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 14:05 by VOMexwnDzOFZ
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:51 by VOMexwnDzOFZ
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:45 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:54 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:34 by VOMexwnDzOFZ
[考博] 招收博士生一名 +3 mandolin 2026-10-10 3/150 2026-10-11 10:21 by 不是山谷！
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 4/200 2026-10-11 03:14 by M0zrYVSAnxpE
[有机交流] 各位大佬，路线设计求助 +6 zapen 2026-10-08 8/400 2026-10-10 15:59 by zapen
[有机交流] 我应该选哪条合成路线让实验成功率高一些？ +5 jing816y 2026-10-08 9/450 2026-10-10 09:05 by zapen
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭