应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于引物退火温度
141/2返回列表12下一页
查看: 2287  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

weiminhb

铁虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于引物退火温度

之前设计的引物能扩增出条带，后来加入了酶切位点，新的引物最佳退火温度会不会变化？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-11-01 14:04:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

虫子火箭兵

金虫 (正式写手)
应该不会
回复此楼
2楼2010-11-01 14:21:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

linqin1029

新虫 (初入文坛)
可以不用变！
回复此楼
3楼2010-11-01 14:45:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weiminhb

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 虫子火箭兵 at 2010-11-01 14:21:09:
应该不会

还是决定先做一下梯度PCR，确定一下
赞一下 回复此楼
4楼2010-11-01 15:13:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)

大洪
引入几个酶切位点，才改变几个碱基，退火温度一般是不会改变滴
赞一下 回复此楼
青春的岁月，我们身不由己，只因这胸中燃烧的梦想！
5楼2010-11-01 15:15:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fzfangtao

木虫 (正式写手)
不会变多少的
回复此楼
6楼2010-11-01 16:42:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-11-01 18:52:27
我的看法跟以上的都不一样
退火温度怎么可能不变呢？改变一个碱基都会变，酶切位点，至少都4~6个碱基了吧，然后还有保护剪辑再多2~4个，温度至少可以变5度了

我的建议是，在前面8~10轮循环用原引物的退火做PCR，后面的十几二十个用全长引物的退火来做。这样做出来的PCR，特异性高，效率也高。
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2010-11-01 16:59:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yixuanwin

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-11-01 16:59:33:
我的看法跟以上的都不一样
退火温度怎么可能不变呢？改变一个碱基都会变，酶切位点，至少都4~6个碱基了吧，然后还有保护剪辑再多2~4个，温度至少可以变5度了

我的建议是，在前面8~10轮循环用原引物的退火做PC ...

这是最好的办法。如果片段小的话，就不用这么麻烦了。
赞一下 回复此楼
8楼2010-11-01 17:21:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
Originally posted by yixuanwin at 2010-11-01 17:21:34:


这是最好的办法。如果片段小的话，就不用这么麻烦了。

其实一点都不麻烦，不都是机器完成的活儿么~~要是换做以前用水浴锅做PCR，咔咔
赞一下 回复此楼
9楼2010-11-01 17:26:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weiminhb

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-11-01 16:59:33:
我的看法跟以上的都不一样
退火温度怎么可能不变呢？改变一个碱基都会变，酶切位点，至少都4~6个碱基了吧，然后还有保护剪辑再多2~4个，温度至少可以变5度了

我的建议是，在前面8~10轮循环用原引物的退火做PC ...

感谢交流！你是说前8-10个循环用原引物退火温度PCR，后面的用新引物的退火温度PCR，是吗？那新引物的退火温度怎么确定啊？谢谢
赞一下 回复此楼
10楼2010-11-02 09:27:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 weiminhb 的主题更新
141/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[有机交流] OpenAI又攻克数学难题了，离AI做有机合成还有多远？ +4 wangyl_123 2026-10-10 8/400 2026-10-12 18:09 by wangyl_123
[硕博家园] 极限拉扯，如何抉择 +5 Isak0320 2026-10-12 7/350 2026-10-12 18:03 by 有人要害朕
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:34 by XQNyDCa1Tk5n
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:15 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 22:11 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 14:25 by VOMexwnDzOFZ
[教师之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 (EPI+-1)(金币-50) +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 14:05 by VOMexwnDzOFZ
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:51 by VOMexwnDzOFZ
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:45 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:54 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:34 by VOMexwnDzOFZ
[考博] 招收博士生一名 +3 mandolin 2026-10-10 3/150 2026-10-11 10:21 by 不是山谷！
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 4/200 2026-10-11 03:14 by M0zrYVSAnxpE
[有机交流] 各位大佬，路线设计求助 +6 zapen 2026-10-08 8/400 2026-10-10 15:59 by zapen
[基金申请] 入职后第一次管课题组的专利缴费，对账才发现官费比别人多掏了一倍 +5 13108017953 2026-10-08 5/250 2026-10-10 11:15 by wdwd123
[有机交流] 我应该选哪条合成路线让实验成功率高一些？ +5 jing816y 2026-10-08 9/450 2026-10-10 09:05 by zapen
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭