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weiminhb

铁虫 (小有名气)

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[交流] 【求助/交流】关于引物退火温度

之前设计的引物能扩增出条带，后来加入了酶切位点，新的引物最佳退火温度会不会变化？

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1楼2010-11-01 14:04:39

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yixuanwin

铁杆木虫 (正式写手)

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专业: 基因组学

引用回帖:

Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-11-01 16:59:33:
我的看法跟以上的都不一样
退火温度怎么可能不变呢？改变一个碱基都会变，酶切位点，至少都4~6个碱基了吧，然后还有保护剪辑再多2~4个，温度至少可以变5度了

我的建议是，在前面8~10轮循环用原引物的退火做PC ...

这是最好的办法。如果片段小的话，就不用这么麻烦了。