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weiminhb

铁虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于引物退火温度

之前设计的引物能扩增出条带,后来加入了酶切位点,新的引物最佳退火温度会不会变化?
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weiminhb

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 虫子火箭兵 at 2010-11-01 14:21:09:
应该不会

还是决定先做一下梯度PCR,确定一下
4楼2010-11-01 15:13:13
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weiminhb

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-11-01 16:59:33:
我的看法跟以上的都不一样
退火温度怎么可能不变呢?改变一个碱基都会变,酶切位点,至少都4~6个碱基了吧,然后还有保护剪辑再多2~4个,温度至少可以变5度了

我的建议是,在前面8~10轮循环用原引物的退火做PC ...

感谢交流!你是说前8-10个循环用原引物退火温度PCR,后面的用新引物的退火温度PCR,是吗?那新引物的退火温度怎么确定啊?谢谢
10楼2010-11-02 09:27:12
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