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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

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Originally posted by weiminhb at 2010-11-02 09:27:12:



      感谢交流!你是说前8-10个循环用原引物退火温度PCR,后面的用新引物的退火温度PCR,是吗?那新引物的退火温度怎么确定啊?谢谢

引物合成单上面,50mM [Na+]的Tm加5~10度即可
11楼2010-11-02 11:29:43
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冬虫夏草1

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by weiminhb at 2010-11-02 09:27:12:



      感谢交流!你是说前8-10个循环用原引物退火温度PCR,后面的用新引物的退火温度PCR,是吗?那新引物的退火温度怎么确定啊?谢谢

再用程序设计完引物后会给一个Tm值呀,一般减去5度就是退火温度!
倚楼听风雨,淡看江湖路!
12楼2010-11-02 13:25:13
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

影响应该不会很大,但肯定有影响。较保险的方法是先比较一下两对引物的Tm值,前一半的循环设成较高的退火温度,后一半循环采用较低的退火温度
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
13楼2010-11-02 13:36:34
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camel3882

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by weiminhb at 2010-11-02 09:27:12:



      感谢交流!你是说前8-10个循环用原引物退火温度PCR,后面的用新引物的退火温度PCR,是吗?那新引物的退火温度怎么确定啊?谢谢

可以用一些软件来确定,比如说primer premier
14楼2010-11-03 10:10:28
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