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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 医学 » 基础 » 【求助】细胞复苏不成功，出现了一些问题。
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apple1057

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助】细胞复苏不成功，出现了一些问题。已有4人参与

大家好，我们实验室的细胞最近出了些问题，每次复苏后都长得不好，形态改变而且不太增殖，最后在显微镜下观察，贴壁细胞很少，我们养的是PIEC细胞，以前都是消化后12小时就能长满，现在复苏后两天，丰度30%左右，我们实验都很注意，培养基.血清都换了，观察瓶内也没有污染，我想请教一下这是怎么回事？谢谢
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1楼2010-10-27 15:28:45
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happychou

新虫 (初入文坛)
★
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如果是复苏一批次的细胞，考虑是冻存没有做好
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2楼2010-10-28 22:50:31
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apple1057

新虫 (初入文坛)
谢谢，我们复苏的细胞有-80冰箱保存的，有液氮保存的，复苏时冻存管里液体的颜色也不同，我想请教这个跟复苏成功有没有关系？
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3楼2010-10-29 08:49:24
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keilion

铜虫 (小有名气)
除非是同一批次的冻存液，否则它们的颜色总会有些差别的。估计还是细胞自身出了问题。
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4楼2010-10-31 11:14:23
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jancy_king

新虫 (初入文坛)
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可能是冻存的时候出问题了，一般细胞拿出来复苏不会怎么出问题的。冻存液最保险的方法是DMSO和小牛血清1：9。
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5楼2010-11-01 13:00:34
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happychou

新虫 (初入文坛)
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引用回帖:
Originally posted by apple1057 at 2010-10-29 08:49:24:
谢谢，我们复苏的细胞有-80冰箱保存的，有液氮保存的，复苏时冻存管里液体的颜色也不同，我想请教这个跟复苏成功有没有关系？

-80度一般可以保存三个月，而液氮中可以永久保存。冻存液的比例，DMSO：胎牛血清：培养基=1:2:7。冻存的时候要逐级降温，复苏的时候要迅速。由于冻存液中细胞数量不尽相同，所以颜色可以不一样
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6楼2010-11-03 12:40:01
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apple1057

新虫 (初入文坛)
谢谢，我想请问一下复苏时用10%FBS的话，会不会使细胞状态不好呢？
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7楼2010-11-11 14:31:46
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