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apple1057

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助】细胞复苏不成功,出现了一些问题。已有4人参与

大家好,我们实验室的细胞最近出了些问题,每次复苏后都长得不好,形态改变而且不太增殖,最后在显微镜下观察,贴壁细胞很少,我们养的是PIEC细胞,以前都是消化后12小时就能长满,现在复苏后两天,丰度30%左右,我们实验都很注意,培养基.血清都换了,观察瓶内也没有污染,我想请教一下这是怎么回事?谢谢
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happychou

新虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
如果是复苏一批次的细胞,考虑是冻存没有做好
2楼2010-10-28 22:50:31
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apple1057

新虫 (初入文坛)

谢谢,我们复苏的细胞有-80冰箱保存的,有液氮保存的,复苏时冻存管里液体的颜色也不同,我想请教这个跟复苏成功有没有关系?
3楼2010-10-29 08:49:24
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keilion

铜虫 (小有名气)

除非是同一批次的冻存液,否则它们的颜色总会有些差别的。估计还是细胞自身出了问题。
4楼2010-10-31 11:14:23
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jancy_king

新虫 (初入文坛)


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可能是冻存的时候出问题了,一般细胞拿出来复苏不会怎么出问题的。冻存液最保险的方法是DMSO和小牛血清1:9。
5楼2010-11-01 13:00:34
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happychou

新虫 (初入文坛)


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引用回帖:
Originally posted by apple1057 at 2010-10-29 08:49:24:
谢谢,我们复苏的细胞有-80冰箱保存的,有液氮保存的,复苏时冻存管里液体的颜色也不同,我想请教这个跟复苏成功有没有关系?

-80度一般可以保存三个月,而液氮中可以永久保存。冻存液的比例,DMSO:胎牛血清:培养基=1:2:7。冻存的时候要逐级降温,复苏的时候要迅速。由于冻存液中细胞数量不尽相同,所以颜色可以不一样
6楼2010-11-03 12:40:01
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apple1057

新虫 (初入文坛)

谢谢,我想请问一下复苏时用10%FBS的话,会不会使细胞状态不好呢?
7楼2010-11-11 14:31:46
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