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【文献精读】Oncogenesis Q1：USP5-FASN-PA轴促肝癌，附0.25mM PA+0.5mM OA高脂模型
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各位虫友，分享一篇近期看到的JCR Q1文献，方向是肝癌脂质代谢+泛素化调控，实验设计比较完整，附高脂细胞模型建立条件，做肿瘤代谢、MASLD、泛素化方向的可以看看。 一、文章信息 期刊：Oncogenesis，2025，14(1)，JCR Q1 标题：Stabilization of FASN by USP5-mediated deubiquitination promotes hepatocellular carcinoma progression 作者：FANG Q, LUO C, LU Y, et al. DOI：10.1038/s41389-025-00589-8 二、研究背景 肝癌（HCC）高发病率、高死亡率，发生发展与代谢重编程，尤其是脂质代谢异常密切相关。脂肪酸合成酶FASN是催化棕榈酸PA从头合成的限速酶，在肝癌中常高表达，促进肿瘤生长和转移。蛋白质稳定性受泛素化修饰精密调控，去泛素化酶DUBs如USP5能通过移除泛素链稳定靶蛋白，已在多种癌症中显示促癌功能。但USP5是否通过调控FASN影响肝癌进展，尚不完全清楚。 三、技术路线 临床样本+TCGA等公共数据库，分析USP5在HCC中的表达及与预后相关性； Huh7和SK-Hep-1肝癌细胞系构建USP5稳定敲低及过表达模型； CCK-8、克隆形成、Transwell评估增殖、迁移、侵袭； 油红O、尼罗红染色+脂质组学分析脂质积累及脂肪酸谱； Co-IP、蛋白质组学、泛素化分析、MG132、CHX追踪等揭示USP5与FASN互作及稳定性调控； 小鼠皮下移植瘤模型在体验证USP5-FASN信号轴。 四、高脂细胞模型建立 细胞培养于6孔板，70-80%汇合时，加入棕榈酸PA 0.25 mM + 油酸OA 0.5 mM，0.5% BSA，处理24 h。 油红O染色：PBS洗3-4次，4%多聚甲醛固定1 h，油红O染色1 h，光镜观察脂滴。 尼罗红染色：4%多聚甲醛固定后，按尼罗红染色流程观察。 资料中提到的KC006高脂细胞添加剂，包括独立包装的6 mmol/L棕榈酸钠、12 mmol/L油酸钠及溶剂对照，无菌液体，可直接使用，溶剂无毒、常温无析出、冻融无析出、无需加热助溶。棕榈酸钠可诱导细胞损伤和炎症，油酸钠可诱导细胞代谢异常，可单独或联合使用。部分肝细胞较敏感，单独使用PA或OA也可能获得理想结果，但研究MASLD时多数文献更推荐棕榈酸钠与油酸钠联合诱导。 五、主要结果 USP5正向调控HCC恶性进展 Western blot证实，shUSP5-1和shUSP5-2均能在Huh7和SK-Hep-1中高效敲低USP5。敲低USP5后，CCK-8增殖放缓、克隆形成减少、Transwell迁移侵袭穿膜细胞数显著降低。过表达USP5则增强增殖、克隆形成及侵袭转移。USP5是驱动HCC恶性进展的关键因子。 USP5通过重塑脂质代谢促进HCC进展 TCGA分析显示，USP5高表达与脂肪酸降解通路基因集富集分数显著负相关。敲低USP5后，油红O染色红色脂滴面积与强度下降，尼罗红荧光减弱，提示细胞内中性脂质储存能力受损。脂质组学显示，以PA为代表的饱和脂肪酸SFA明显降低，部分多不饱和脂肪酸PUFA如亚油酸相对丰度上升。 外源补充PA验证USP5-FASN轴功能依赖性 在USP5敲低的Huh7细胞中，外源添加0.25 mM PA后，增殖速率部分恢复，Transwell迁移与侵袭能力回升。定量显示，PA处理的USP5敲低组穿膜细胞数较未处理敲低组增加约50%，但未恢复到shNC水平。说明PA是USP5下游重要效应分子，介导部分促癌功能，但USP5可能还通过其他并行或交叉通路发挥作用。 USP5通过去泛素化稳定FASN调控PA合成 Co-IP/MS鉴定FASN为USP5关键相互作用蛋白，Co-IP在Huh7和SK-Hep-1中证实USP5与FASN直接物理互作。敲低USP5导致FASN泛素化修饰水平显著升高，并加速其经蛋白酶体途径降解；过表达USP5则稳定FASN。机制上，USP5直接结合并去泛素化FASN，抑制其泛素化降解，稳定FASN蛋白水平，导致产物PA含量升高。临床样本分析显示USP5与FASN表达呈正相关。 六、结论 USP5在肝细胞癌组织中显著高表达，与肿瘤大小、卫星结节、血管侵犯等不良病理特征及患者预后不良密切相关。功能上，USP5促进肝癌细胞体外增殖、迁移、侵袭及脂质积累，并在体内加速肿瘤生长。机制上，USP5-FASN-PA轴促进HCC进展。靶向该轴，如开发USP5或FASN抑制剂，可能成为肝癌治疗潜在新策略。 七、亮点 从去泛素化酶角度连接脂质代谢，USP5-FASN-PA轴较有新意； 临床+细胞功能+机制+体内模型，证据链相对完整； PA回补只部分恢复，提示USP5可能还有其他底物或通路； 高脂模型采用PA+OA联合，更贴近MASLD；即用型高脂添加剂可减少FFA析出、加热助溶等翻车问题。 八、讨论 大家做肝癌高脂模型，PA单用还是PA+OA联合？浓度和时长多少？ 油红O/尼罗红定量，用什么方法更稳？ FASN抑制剂与USP5抑制剂联合，是否可能协同？ USP5其他底物是否也参与脂质代谢调控？ 九、关键词/标签 #肝癌 #HCC #USP5 #FASN #PA #脂质代谢 #泛素化 #高脂细胞模型 #MASLD #Oncogenesis #JCRQ1 声明：仅作科研文献解读，不构成医疗建议。试剂信息根据原文及资料整理，不构成购买建议，无利益相关。欢迎虫友回帖交流。 |
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