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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于酶切问题
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beisimai895

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于酶切问题 已有10人参与

最近做了一个克隆，转化之后做菌落PCR，验证均连接成功，但是酶切的时候却观察不到目的条带，做的这个克隆，载体大小为7KB，目的片段为480bp，酶切后，可以看见载体，但看不到目的条带，现在有个问题想请教，是否是因为目的片段和载体相差太大，所用即使观察到了载体（条带也不是很亮），但是去看不到目的片段，或者还有别的原因？
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1楼 2010-10-26 13:12:05
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898763077

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
该是相差太悬殊了，如果载体也不是很亮，那么小的片段肯定是看不到的。
本文来自: 小木虫论坛 " target="_blank">http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=2529197&fpage=1
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4楼2010-10-26 20:30:13
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你说的有可能，还有一个可能——没有切开！
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2楼2010-10-26 13:15:00
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
应该是相差太悬殊了，如果载体也不是很亮，那么小的片段肯定是看不到的。
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Thank-you，so-blue.
3楼2010-10-26 20:26:06
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glannee

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2):鼓励交流！ 2010-10-26 22:33:02
我做过一个类似的，0.3kb大小的条带也可以看到。
如果酶切没问题的话，只是需要加大酶切体系，比如100μL，然后上样、回收……
不过还有一种可能，就是你的载体上存在类似的序列，导致你P出来的并非是连接上去的片段
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纯如百合，坚如铁。
5楼2010-10-26 21:59:08
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