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beisimai895

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于酶切问题 已有10人参与

最近做了一个克隆,转化之后做菌落PCR,验证均连接成功,但是酶切的时候却观察不到目的条带,做的这个克隆,载体大小为7KB,目的片段为480bp,酶切后,可以看见载体,但看不到目的条带,现在有个问题想请教,是否是因为目的片段和载体相差太大,所用即使观察到了载体(条带也不是很亮),但是去看不到目的片段,或者还有别的原因?
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glannee

铁杆木虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+2):鼓励交流! 2010-10-26 22:33:02
我做过一个类似的,0.3kb大小的条带也可以看到。
如果酶切没问题的话,只是需要加大酶切体系,比如100μL,然后上样、回收……
不过还有一种可能,就是你的载体上存在类似的序列,导致你P出来的并非是连接上去的片段
纯如百合,坚如铁。
5楼2010-10-26 21:59:08
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你说的有可能,还有一个可能——没有切开!
2楼2010-10-26 13:15:00
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
应该是相差太悬殊了,如果载体也不是很亮,那么小的片段肯定是看不到的。
Thank-you,so-blue.
3楼2010-10-26 20:26:06
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898763077

铜虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
该是相差太悬殊了,如果载体也不是很亮,那么小的片段肯定是看不到的。
本文来自: 小木虫论坛 " target="_blank">http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=2529197&fpage=1
4楼2010-10-26 20:30:13
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