应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】为什么用纯化的PCR产物就扩不出来？？？
151/2返回列表12下一页
查看: 2916  |  回复: 14
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

luckydong1

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】为什么用纯化的PCR产物就扩不出来？？？ 已有13人参与

各位大侠们好，请教一个问题，同样的基因，用未纯化的PCR产物和克隆质粒做模板都能P出目的片段，可是用胶回收纯化的PCR产物做模板却P不出来，请问是什么原因？望赐教
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-09-29 23:00:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

sarah-miao

银虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
其实主要貌似不是乙醇残留的影响，而是PCR产物其实不适合作为模板进行扩增，最好还是从载体载体上扩，而且，你如果是PCR用来以后的连接用的，PCR条带不亮，以后很多后续工作无法完成的，具体PCR产物不适合做PCR模板的原因可能是因为PCR酶的问题，我也没深究，回头找一个很牛的师姐问问，帮你解释下
赞一下(1人) 回复此楼
14楼2012-12-04 21:44:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

zking5129

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
是不是有可能在胶回收的时候，乙醇没有晾干或者纯化后模板浓度变的太低了？没遇到过这种情况，只是猜测。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2010-09-30 08:52:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yixuanwin

铁杆木虫 (正式写手)
★
lstt09nk(金币+1):有这种可能~ 2010-10-09 10:41:52
最大可能 乙醇残留了。

其次  其他操作失误。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2010-09-30 09:53:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

寂寞之巅

铁虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我也遇到过同样的情况，能P出来，但是量很少。
恳请大虾赐教
赞一下(1人) 回复此楼
好好学习，天天向上
4楼2010-09-30 12:20:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

amilie030312

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):鼓励交流~ 2010-10-09 10:42:13
如果完全没有条带有可能根本就没回收回来，或者回收回来的条带不对，一般纯化回收的样本要稀释后才能够做普通PCR的样本来使用，否则样本浓度太大了，也扩不好的。乙醇残留也会有影响啦。
你中间有酶切的步骤没，看看是不是酶切的时候酶不好，有核算外切酶活性，把末端切掉啦
赞一下(2人) 回复此楼
5楼2010-09-30 12:32:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

在雨中

金虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
LS是高手
回复此楼
6楼2010-09-30 16:02:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sn198651

银虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
4楼正解 有可能因为 你的目的片段含量低 片段不亮 回收后都有可能会有损失
导致你回收后什么都没有
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2010-09-30 18:07:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luckydong1

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by amilie030312 at 2010-09-30 12:32:09:
如果完全没有条带有可能根本就没回收回来，或者回收回来的条带不对，一般纯化回收的样本要稀释后才能够做普通PCR的样本来使用，否则样本浓度太大了，也扩不好的。乙醇残留也会有影响啦。
你中间有酶切的步骤没， ...

谢谢指教。我的片段是很亮的，而且没有杂带，回收之后的样本也稀释了十倍才做模板的，但是P出来的是弥散带，这么说来，应该是乙醇残留？？再次谢谢指教
赞一下 回复此楼
8楼2010-10-02 09:12:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lhwei1987

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
同意四楼说的，如果条带很亮，我会稀释1000到10000倍
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2010-10-02 15:46:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hkfgwww

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我也遇到过这样的问题，稀释不管用，乙醇残留根本不可能，我都在37度烘箱烘了几个小时。

期待高手解答。
赞一下(2人) 回复此楼
微生物发酵
10楼2010-10-02 18:58:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 luckydong1 的主题更新
151/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 wsYGJnURYvm6 2026-08-31 3/150 2026-09-01 01:52 by o3EMxHUAQDtS
[公派出国] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 EZ67DG6CvcKL 2026-08-31 4/200 2026-09-01 01:30 by o3EMxHUAQDtS
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 EZ67DG6CvcKL 2026-08-31 4/200 2026-09-01 01:30 by o3EMxHUAQDtS
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +6 叶九微 2026-08-26 6/300 2026-08-31 23:54 by yudaoqian88
[基金申请] 国社科又开始会评了，不知道这次命运如何 +7 雨打竹帘 2026-08-30 11/550 2026-08-31 23:16 by hittle2008
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 EZ67DG6CvcKL 2026-08-31 3/150 2026-08-31 22:23 by o3EMxHUAQDtS
[基金申请] 面上意见出来了 +12 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 23/1150 2026-08-31 18:57 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 能否申诉？ +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[文学芳草园] 梦想 +5 myrtle 2026-08-26 5/250 2026-08-31 14:40 by hahaboy
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已，这评审意见是按照杰青的条件评的吧？ +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难 +12 Kittylucky 2026-08-27 13/650 2026-08-29 00:04 by superceng
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜？ 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 我不理解！ +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 牛来！米来！面来！ +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭