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汕头大学海洋科学接受调剂
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luckydong1

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】为什么用纯化的PCR产物就扩不出来??? 已有13人参与

各位大侠们好,请教一个问题,同样的基因,用未纯化的PCR产物和克隆质粒做模板都能P出目的片段,可是用胶回收纯化的PCR产物做模板却P不出来,请问是什么原因?望赐教
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amilie030312

金虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):鼓励交流~ 2010-10-09 10:42:13
如果完全没有条带有可能根本就没回收回来,或者回收回来的条带不对,一般纯化回收的样本要稀释后才能够做普通PCR的样本来使用,否则样本浓度太大了,也扩不好的。乙醇残留也会有影响啦。
你中间有酶切的步骤没,看看是不是酶切的时候酶不好,有核算外切酶活性,把末端切掉啦
5楼2010-09-30 12:32:09
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zking5129

铁虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
是不是有可能在胶回收的时候,乙醇没有晾干或者纯化后模板浓度变的太低了?没遇到过这种情况,只是猜测。
2楼2010-09-30 08:52:59
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yixuanwin

铁杆木虫 (正式写手)


lstt09nk(金币+1):有这种可能~ 2010-10-09 10:41:52
最大可能 乙醇残留了。

其次  其他操作失误。
3楼2010-09-30 09:53:29
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寂寞之巅

铁虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我也遇到过同样的情况,能P出来,但是量很少。
恳请大虾赐教
好好学习,天天向上
4楼2010-09-30 12:20:33
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