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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】为什么用纯化的PCR产物就扩不出来？？？
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amilie030312

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by luckydong1 at 2010-10-02 09:12:17:



谢谢指教。我的片段是很亮的，而且没有杂带，回收之后的样本也稀释了十倍才做模板的，但是P出来的是弥散带，这么说来，应该是乙醇残留？？再次谢谢指教

如果是乙醇残留应该是对PCR有抑制，不会条带很亮的。
弥散多半是温度不对，温度低了会出弥散，不知道你的是不是这个情况，我原来是模板稀释一百倍的
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11楼2010-10-09 10:36:19
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zhangxn2010

木虫 (著名写手)

让一切随风飞翔
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
或者胶回收的带是杂带也说不定，总之多做几次
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一直向前！
12楼2010-10-09 10:42:18
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guanjinyan87

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
先测下OD值，确认下回收到了
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13楼2012-12-04 20:42:22
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sarah-miao

银虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
其实主要貌似不是乙醇残留的影响，而是PCR产物其实不适合作为模板进行扩增，最好还是从载体载体上扩，而且，你如果是PCR用来以后的连接用的，PCR条带不亮，以后很多后续工作无法完成的，具体PCR产物不适合做PCR模板的原因可能是因为PCR酶的问题，我也没深究，回头找一个很牛的师姐问问，帮你解释下
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14楼2012-12-04 21:44:03
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swach

铁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我是新手，有一点不明白。你用的是胶回收试剂盒吗，那第一步PCR用的是什么引物，是16S通用引物吗？胶回收纯化得到的基因组和初提的基因组是不是总量会不同呢？请教
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15楼2014-07-07 17:23:53
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