应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】求助一个pcr条件的问题
51/1返回列表
查看: 1210  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

pop_hjx_41

铜虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】求助一个pcr条件的问题 已有5人参与

想求助两个pcr条件的问题：
1.我的两端引物tm都是57，在设定尝试退火温度的时候应该设定在多少合适呢？
2.关于延伸 和退火的时间是不是和片段的长度有关系呢 特别是延伸时间是怎么算出来的呢（用Dreamtaq）我的片段在600bp左右，请问应该设定在多少比较合适？如果过长了会有什么影响呢
呵呵 新手提问 麻烦各位高手作答了
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-09-21 17:04:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小小豆豆

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
楼上的退火温度计算反了，应该是减5至10度。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2010-09-21 22:42:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):热心 2010-09-21 20:00:11
1、用50mM Na+的Tm值作参考，把这个Tm加5~10度即可。不同离子强度下的Tm是不一样的~
2、一般按1kb/min来算。600bp设个40秒足够了
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2010-09-21 19:45:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 小小豆豆 at 2010-09-21 22:42:05:
楼上的退火温度计算反了，应该是减5至10度。

没有反，你说的减，是传统的以设计软件PP5给出的Tm做参考的
而事实上，按照我的个人经验，按照PP5的Tm减5做出来的效果不好，比如做半定量，经常有dimer
还不如参考50mM Na+的Tm来加5~10，适用克隆和实时定量级的实验
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2010-09-21 23:42:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dingyanhua

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
还是做个温度梯度比较好
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2010-09-22 09:39:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭