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pop_hjx_41

铜虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 2.7
散金: 10
帖子: 50
在线: 7.3小时
虫号: 866899
注册: 2009-10-09
专业: 免疫生物学

[交流] 【求助/交流】求助一个pcr条件的问题已有5人参与

想求助两个pcr条件的问题：
1.我的两端引物tm都是57，在设定尝试退火温度的时候应该设定在多少合适呢？
2.关于延伸和退火的时间是不是和片段的长度有关系呢特别是延伸时间是怎么算出来的呢（用Dreamtaq）我的片段在600bp左右，请问应该设定在多少比较合适？如果过长了会有什么影响呢
呵呵新手提问麻烦各位高手作答了

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1楼 2010-09-21 17:04:14

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

雕刻你的拾光

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 143.4
帖子: 34
在线: 15小时
虫号: 3596576
注册: 2014-12-16
专业: 病原真菌、真菌感染与宿主

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖提问 2016-08-09 08:12:08

退火温度一般比TM低5到10度，你可以设置成52，还可以做个梯度pcr摸索一下最佳的退火温度，延伸时间一般根据你的片段长度和酶来计算，一般taq酶一分钟合成大约1000bp，你的设置45s就差不多了，长了会降低pcr的准确性，产生非特异的条带

7楼2016-08-07 21:09:43

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