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jiangqingbin

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】目的基因PCR后电泳出现多条带

各位大虫,我用农杆菌提取的质粒DNA,然后对目的基因(450bp)进行PCR扩增,电泳后发现多条带,其中两条最为清晰,用的marker是100bp的,发现在1000bp附近也有一条很清晰地带,请问是什么原因?
我对引物重复核对了几次,并且找公司又重新合成,可还是出现这样的结果。
是不是在提DNA后RNA溶解不充分,扩增体系里DNA样本量太多跑出条带,
或者DNA模板量太少出现引物二聚体等等....
还请各位大牛帮忙指导!!多谢
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snowice

银虫 (小有名气)


jiangqingbin(金币+2): 2010-09-15 14:41:50
scelab(金币+1):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-09-15 23:30:00
不会是引物二聚体,它一般都在100bp以下,升高一下退火温度,看看行不行,拿你的引物和重组质粒的序列在NCBI上Blast一下,看看有没有其他结合的地方,最后再考虑模板的问题。不行就割胶回收嘛,如果你是要pcr产物的话
爱吃爱睡懒得要死的猪头
2楼2010-09-15 12:24:01
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