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yujiaping1

木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】有意思的rna非变性凝胶电泳-之真相大白 已有5人参与

用 qiagen mini ran easy 提的 用的标准提取过程中danase消化步骤
30度 15分钟

用的是非变性琼脂糖
分子标记 标准100bp dna marker
从上到下最亮的三条带分别是2000 1000 和 500
28s 上出现若干清晰度不同的条带,开始疑为dna没处理干净,但是经过Rna处理样品验证后,所有条带消失,说明这些可疑条带不是DNA,那么这个RNA非变性凝胶电泳检测RNA纯度时的判断就应该注意了,并不是28s 上方的有条带就是dna污染,不知道这个分析是否只适用于rnaeasy盒子提取。大家有没有遇到过相似的情况?

原来这条可以带真的不是dna
以下为验证试验及其结果


其中没有rna酶处理的样品出现严重降解是因为
相邻点样孔中的rna酶未作失活活脱酶处理,在跑胶过程中降解了相邻点样孔的Rna
原来动物的Rna非变性凝胶电泳并不是一成不变的3条带!差点迁怒与qiagen 呵呵
这件事告诉我们,有时候多钻点牛角尖是必要的

[ Last edited by yujiaping1 on 2010-9-14 at 16:06 ]
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yujiaping1

木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by liyong1981 at 2010-09-14 11:09:01:
楼主这么纠结做什么?原因?

我原来一直很信任qiagen觉得王牌产品不可能这么烂把?所以跟它较劲

[ Last edited by yujiaping1 on 2010-9-14 at 14:24 ]
7楼2010-09-14 11:25:07
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虫子火箭兵

金虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
看天(金币+2):鼓励回答 2010-09-13 20:19:16
用DNAase在处理一下吧,DNA条带没处理干净啊。不过你要是下一步做northern的话应该不影响,如果做反转录对实验结果可能有影响,而且5.8s RNA条带也不清楚。
2楼2010-09-13 20:17:43
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yujiaping1

木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by 虫子火箭兵 at 2010-09-13 20:17:43:
用DNAase在处理一下吧,DNA条带没处理干净啊。不过你要是下一步做northern的话应该不影响,如果做反转录对实验结果可能有影响,而且5.8s RNA条带也不清楚。

碰巧我做的是rt pcr
还要做原核表达
怎么qiagen的盒子这么烂
还不如山寨版组合

[ Last edited by yujiaping1 on 2010-9-13 at 21:49 ]
3楼2010-09-13 20:51:55
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yujiaping1

木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by 虫子火箭兵 at 2010-09-13 20:17:43:
用DNAase在处理一下吧,DNA条带没处理干净啊。不过你要是下一步做northern的话应该不影响,如果做反转录对实验结果可能有影响,而且5.8s RNA条带也不清楚。

qiagen 的盒子在抽提中将5s降解了所以看不到5s这个正常。
4楼2010-09-13 22:06:50
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