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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 综合其他 » 【求助/交流】请教Western blot出现非特异性条带的怎么解决
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crab1983

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】请教Western blot出现非特异性条带的怎么解决

大家好，我的蛋白是30KD，我做Western blot封闭用的是30%的BSA，时间是4度过夜，我用的一抗是兔抗组氨酸标签抗体，37度孵育2h，二抗是羊抗兔的37度孵育2h，但是结果总出现非特异性条带，请高手帮帮忙！
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1楼2010-09-13 09:50:38
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monkeyguoguo

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by bingdong05 at 2012-04-17 14:00:10
1）：有可能是蛋白降解所导致；2）有可能是抗体加的太多导致出现非特异性条带，降低一抗，二抗的浓度 试下

如果是蛋白降解，内参蛋白做出来的单一性怎么样？
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8楼2013-05-30 16:18:12
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ben1147

木虫 (正式写手)
根据具体条带情况选择优化洗膜或封闭
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2楼2010-09-13 09:53:15
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linysm

银虫 (小有名气)
看看杂带位子，如果在目的蛋白下面有可能是蛋白降解带，做的时候跟个对照吧。
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3楼2010-09-13 11:59:34
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空谷幽风

金虫 (正式写手)
同意3楼的观点，从蛋白本身入手解决吧
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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
4楼2010-11-12 18:46:59
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