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crab1983

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】请教Western blot出现非特异性条带的怎么解决

大家好,我的蛋白是30KD,我做Western blot封闭用的是30%的BSA,时间是4度过夜,我用的一抗是兔抗组氨酸标签抗体,37度孵育2h,二抗是羊抗兔的37度孵育2h,但是结果总出现非特异性条带,请高手帮帮忙!
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monkeyguoguo

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by bingdong05 at 2012-04-17 14:00:10
1):有可能是蛋白降解所导致;2)有可能是抗体加的太多导致出现非特异性条带,降低一抗,二抗的浓度 试下

如果是蛋白降解,内参蛋白做出来的单一性怎么样?
8楼2013-05-30 16:18:12
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ben1147

木虫 (正式写手)

根据具体条带情况选择优化洗膜或封闭
2楼2010-09-13 09:53:15
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linysm

银虫 (小有名气)

看看杂带位子,如果在目的蛋白下面有可能是蛋白降解带,做的时候跟个对照吧。
3楼2010-09-13 11:59:34
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

同意3楼的观点,从蛋白本身入手解决吧
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
4楼2010-11-12 18:46:59
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