24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 910  |  回复: 3
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

ymzfeng

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】连接效率问题 已有3人参与

构建基因表达载体时,设计扩增基因片段的引物5‘端引入了相应的酶切位点及保护碱基,将PCR产物回收纯化后,与目的载体T4连接,老连接不上,想请问用加了保护碱基的PCR产物直接做连接是不是不太好?是不是要做个TA克隆,从T载体上酶切纯化后再与目的载体连接?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ymzfeng

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 周_yan at 2010-09-03 16:26:00:
我也用同样的方法设计引物,一般都是PCR产物回收后先连接克隆载体即T载体,然后提T载体的质粒酶切,再于表达载体连接,成功的效率很高。
PCR产物回收纯化后一般还需要去磷酸化,再于表达载体连接。不知你有没有去 ...

谢谢,之前没去磷酸化
现在已经做了TA 克隆,再去连接了
4楼2010-09-04 14:45:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 4 个回答

周_yan

木虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+2):谢谢交流 2010-09-03 19:23:58
我也用同样的方法设计引物,一般都是PCR产物回收后先连接克隆载体即T载体,然后提T载体的质粒酶切,再于表达载体连接,成功的效率很高。
PCR产物回收纯化后一般还需要去磷酸化,再于表达载体连接。不知你有没有去磷酸化?
2楼2010-09-03 16:26:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

塞外雨

金虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我也是一直连接转化不出来
只想找到关心我、在我犹豫时能给我判断的人
3楼2010-09-03 16:27:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂 +4 翩翩一书生 2026-04-09 4/200 2026-04-10 00:07 by lwk2004
[考研] 299求调剂 +6 ZVVZ13 2026-04-08 6/300 2026-04-09 15:48 by wp06
[考研] 262求调剂 +10 天下第一文 2026-04-04 13/650 2026-04-09 15:16 by 探123
[考研] 26考研调剂0710 0860 +10 补补不补 2026-04-03 15/750 2026-04-09 11:13 by ditto77778
[考研] 求调剂 +13 柒luck 2026-04-07 13/650 2026-04-08 22:46 by 猪会飞
[考研] 324求调剂 +17 想上学求调 2026-04-03 17/850 2026-04-08 20:04 by 我减肥1
[考研] 283求调剂 +19 A child 2026-04-04 19/950 2026-04-08 14:26 by xingguangj
[考研] 287求调剂 +6 Fnhc 2026-04-07 6/300 2026-04-08 10:05 by xingguangj
[考研] 22408 318分求调剂 +4 勤奋的小笼包 2026-04-06 6/300 2026-04-07 15:05 by 纸鹤555
[考研] 316求调剂 +7 yyx想调剂 2026-04-05 7/350 2026-04-07 14:31 by shdgaomin
[考研] 材料调剂 +5 小刘同学吖吖 2026-04-06 5/250 2026-04-06 18:34 by sherry_1901
[考研] 求调剂 +11 xzghyuj 2026-04-04 11/550 2026-04-06 11:49 by lijunpoly
[考研] 调剂 一志愿吉林大学357分 +5 .Starry. 2026-04-04 5/250 2026-04-06 09:28 by cql1109
[考研] 生物与医药086000调剂一志愿西北农林320分 +3 美美女士 2026-04-03 3/150 2026-04-05 21:55 by 学员8dgXkO
[考研] 298求调剂 +7 manman511 2026-04-05 7/350 2026-04-05 10:29 by 唐沐儿
[考研] 325求调剂 +4 春风不借意 2026-04-04 4/200 2026-04-04 22:08 by 啵啵啵0119
[考研] 325求调剂 +4 春风不借意 2026-04-04 4/200 2026-04-04 14:46 by 湘农储能材料
[考研] 一志愿北交大材料工程总分358 +6 cs0106 2026-04-03 6/300 2026-04-04 11:20 by w_xuqing
[考研] 数一英一285求调剂 +7 AZMK 2026-04-03 9/450 2026-04-03 13:03 by ms629
[考研] 求调剂 +3 心想事成可 2026-04-03 3/150 2026-04-03 11:22 by wangjy2002
信息提示
请填处理意见