应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】连接效率问题
41/1返回列表
查看: 1148  |  回复: 3
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

ymzfeng

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】连接效率问题 已有3人参与

构建基因表达载体时，设计扩增基因片段的引物5‘端引入了相应的酶切位点及保护碱基，将PCR产物回收纯化后，与目的载体T4连接，老连接不上，想请问用加了保护碱基的PCR产物直接做连接是不是不太好？是不是要做个TA克隆，从T载体上酶切纯化后再与目的载体连接？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-09-03 15:27:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

周_yan

木虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+2):谢谢交流 2010-09-03 19:23:58
我也用同样的方法设计引物，一般都是PCR产物回收后先连接克隆载体即T载体，然后提T载体的质粒酶切，再于表达载体连接，成功的效率很高。
PCR产物回收纯化后一般还需要去磷酸化，再于表达载体连接。不知你有没有去磷酸化？
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2010-09-03 16:26:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

塞外雨

金虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我也是一直连接转化不出来
赞一下(1人) 回复此楼
只想找到关心我、在我犹豫时能给我判断的人
3楼2010-09-03 16:27:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ymzfeng

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 周_yan at 2010-09-03 16:26:00:
我也用同样的方法设计引物，一般都是PCR产物回收后先连接克隆载体即T载体，然后提T载体的质粒酶切，再于表达载体连接，成功的效率很高。
PCR产物回收纯化后一般还需要去磷酸化，再于表达载体连接。不知你有没有去 ...

谢谢，之前没去磷酸化
现在已经做了TA 克隆，再去连接了
赞一下 回复此楼
4楼2010-09-04 14:45:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 ymzfeng 的主题更新
41/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭