应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】基因组酶切··和DNA 定量分析~谢谢！
101/1返回列表
查看: 1004  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

Silencess

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】基因组酶切··和DNA 定量分析~谢谢！ 已有3人参与

貌似一般酶切都用新提取的DNA `` 我想问下，用之前的DNA 做酶切会有很大的影响么？ 或者 ，-20℃保存条件下，DNA 在多久的期限内酶切效果会比较好呢？

还有就是 我想做一个DNA片段的定量·· 是不是 荧光定量PCR是比较好的选择？
如果是，要注意些什么呢？
  

        求高人指教，不甚感激！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
繁花似錦，年華散盡。
1楼 2010-08-25 11:11:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

banhf

新虫 (初入文坛)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
silicare(金币+1):谢谢交流 2010-08-25 17:59:44
你的DNA可以先跑个脉冲看一下是否降解，再进行试验。
DNA保存时间过长可能会降解而影响酶切结果，如果需要长期保存，最好使其沉淀在70%乙醇中，用时吹干溶解即可。
你的定量如果没有特殊要求的话就用普通的琼脂糖电泳就可以了，DNA样品点一个梯度，Marker点一个梯度就能估出浓度了。
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2010-08-25 14:41:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Silencess

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by banhf at 2010-08-25 14:41:54:
你的DNA可以先跑个脉冲看一下是否降解，再进行试验。
DNA保存时间过长可能会降解而影响酶切结果，如果需要长期保存，最好使其沉淀在70%乙醇中，用时吹干溶解即可。
你的定量如果没有特殊要求的话就用普通的琼脂 ...

呵呵· 谢谢哦~   这个DNA 的片段很小呢·· 我想测其在基因组中的拷贝数~
赞一下 回复此楼
繁花似錦，年華散盡。
3楼2010-08-26 09:09:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

banhf

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你要测拷贝数的话可以做下southern blot
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2010-08-26 13:02:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主
荧光定量也可以
回复此楼
5楼2010-08-26 13:31:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Silencess

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by banhf at 2010-08-26 13:02:28:
你要测拷贝数的话可以做下southern blot

southern 话 能具体定量么? 之前跟师兄做好像也没有具体的数值耶


  当然，，，我还不怎么了解、、。。
赞一下 回复此楼
繁花似錦，年華散盡。
6楼2010-08-27 09:04:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Silencess

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by silicare at 2010-08-26 13:31:30:
荧光定量也可以

那请问    如果做荧光定量的话 有什么要注意的么··？

看到的大部分帖子和文章都是反转录的·· 很少有DNA 水平的。。
赞一下 回复此楼
繁花似錦，年華散盡。
7楼2010-08-27 09:06:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主
★ ★ ★
1949stone(金币+3):够热心 2010-08-28 14:45:33
引用回帖:
Originally posted by Silencess at 2010-08-27 09:06:01:



那请问    如果做荧光定量的话 有什么要注意的么··？

看到的大部分帖子和文章都是反转录的·· 很少有DNA 水平的。。

原理是想通的，只不过荧光定量有时候没有那么灵敏

比如拷贝数是5000和10000可能能够分开，但100和200就分不开了
号称最灵敏的roche也就是1000和2000拷贝的区分度
所以一般还是得southern的
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2010-08-27 09:21:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Silencess

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by silicare at 2010-08-27 09:21:08:


原理是想通的，只不过荧光定量有时候没有那么灵敏

比如拷贝数是5000和10000可能能够分开，但100和200就分不开了
号称最灵敏的roche也就是1000和2000拷贝的区分度
所以一般还是得southern的

可是southern 只能看条带吧？  能具体定量呀？
赞一下 回复此楼
繁花似錦，年華散盡。
9楼2010-08-28 13:15:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主
引用回帖:
Originally posted by Silencess at 2010-08-28 13:15:36:


可是southern 只能看条带吧？  能具体定量呀？

和western一样，灰度
赞一下 回复此楼
10楼2010-08-28 22:37:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Silencess 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 323求调剂 +5 洼小桶 2026-03-18 5/250 2026-03-22 17:38 by luoyongfeng
[考研] 一志愿中南化学（0703）总分337求调剂 +9 niko- 2026-03-19 10/500 2026-03-22 16:08 by ColorlessPI
[考研] 305分求调剂（食品工程） +4 Sxy112 2026-03-21 6/300 2026-03-22 15:26 by 无懈可击111
[考研] 269专硕求调剂 +6 金恩贝 2026-03-21 6/300 2026-03-22 14:31 by ColorlessPI
[考研] 一志愿070300浙大化学358分，求调剂！ +3 酥酥鱼.. 2026-03-21 3/150 2026-03-22 11:31 by 杨杨杨紫
[考研] 085600材料与化工306 +4 z1z2z3879 2026-03-21 4/200 2026-03-21 23:44 by ms629
[考研] 280求调剂 +11 咕噜晓晓 2026-03-18 12/600 2026-03-21 22:40 by ACS Nano——
[考研] 333求调剂 +5 87639 2026-03-21 7/350 2026-03-21 19:31 by ColorlessPI
[考研] 求助 +5 梦里的无言 2026-03-21 6/300 2026-03-21 17:51 by 学员8dgXkO
[考研] 277材料科学与工程080500求调剂 +6 自由煎饼果子 2026-03-16 6/300 2026-03-21 17:21 by 学员8dgXkO
[考研] 一志愿天津大学化学工艺专业（081702）315分求调剂 +12 yangfz 2026-03-17 12/600 2026-03-21 03:30 by JourneyLucky
[考研] 华东师范大学-071000生物学-293分-求调剂 +3 研究生何瑶明 2026-03-18 3/150 2026-03-21 01:30 by JourneyLucky
[考研] 中南大学化学学硕337求调剂 +3 niko- 2026-03-19 6/300 2026-03-20 21:58 by luoyongfeng
[考研] 353求调剂 +3 拉钩不许变 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:56 by JourneyLucky
[考研] 081700化工学硕调剂 +3 【1】 2026-03-16 3/150 2026-03-19 23:40 by edmund7
[考研] 288求调剂，一志愿华南理工大学071005 +5 ioodiiij 2026-03-17 5/250 2026-03-19 18:22 by zcl123
[考研] 一志愿福大288有机化学，求调剂 +3 小木虫200408204 2026-03-18 3/150 2026-03-19 13:31 by houyaoxu
[考研] 0854可跨调剂，一作一项核心论文五项专利，省、国级证书40+数一英一287 +8 小李0854 2026-03-16 8/400 2026-03-18 14:35 by 搏击518
[考研] 085601求调剂 +4 Du.11 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:08 by ruiyingmiao
[考研] [导师推荐]西南科技大学国防/材料导师推荐 +3 尖角小荷 2026-03-16 6/300 2026-03-16 23:21 by 尖角小荷
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭