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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】求助：高手帮忙
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gwd0312

木虫 (正式写手)

“无冕之王”

[交流] 【求助/交流】求助：高手帮忙 已有2人参与

本人是一实验新手，最近想将一空载体转到裂殖酵母里面，已经做了好几次了，没有一次成功的。有一次平板上长了有十几个菌落，但是摇菌的时候却没有摇起来，这一步做不出来下面的就没有办法做，急需高手指教，先谢了！下面是我的实验参考步骤：
（1）划线复壮宿主菌后，挑1个单克隆菌落于10ml YE液体培养基中，150rpm，28℃振荡培养过夜。
（2）将培养的菌液按1％转接到100ml YE液体培养基中，振荡培养至OD600=0.6－0.8，取出置于冰上20min。
（3）将菌液装入灭菌的50ml离心管中，4℃ 4000g离心15min，回收菌体。
（4）菌体以10ml冰预冷的1.0M的山梨醇冲洗，在4℃ 4000g离心10min。
（5）反复3-4次。
（6）用3ml预冷的1.2M的山梨醇悬浮。
（7）每100μl分装后储存于4℃冰箱备用。
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持之以恒、永不放弃！
1楼 2010-08-15 10:30:10
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violet.zhou

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
转化进酵母不需要电转化的吗
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2楼2010-08-15 11:00:47
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gwd0312

木虫 (正式写手)

“无冕之王”
引用回帖:
Originally posted by violet.zhou at 2010-08-15 11:00:47:
转化进酵母不需要电转化的吗

我就是用的电击转化，现在也找不到问题出在哪里？
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持之以恒、永不放弃！
3楼2010-08-16 10:48:57
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violet.zhou

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
转化不成功应该要考虑下感受态的问题
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4楼2010-08-16 12:01:11
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