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【求助/交流】请教：用高氯酸脱蛋白用量应怎么确定？
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准备用酶促荧光法测粪便样品中的D－乳酸含量， 原理：D－乳酸在D－乳酸脱氢酶（D-LDH）的催化下生成丙酮酸，同时把NAD+转变为NADH，NADH具有荧光特性，通过测定NADH 的浓度达到间接测样品中 D－乳酸盐的浓度。已知未去蛋白的样品易受到内源性的L-LDH和D-LDH的干扰，因为NAD+是这两个酶的共同底物。为了避免非特异的NAD+转化成 NADH而导致D－乳酸盐浓度的高估，对粪便样品进行前处理非常必要。查文献说，用高氯酸脱蛋白，用量与样品体积比为1：1。 存在疑问：用高氯酸脱蛋白用量应怎么确定？如果用量不足，不足以除去蛋白（内源性酶），如果用量过高，可能对其后加入的酶具有破坏作用，怎样才能确定一个合适的用量，即能保证除去样品中的内源性酶，又不至于影响后来加入用来反应的酶，请各位高手帮忙解决一下这个问题？谢谢！如果不用高氯酸脱蛋白，用其它的试剂也存在同样的问题。 |
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