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gwd0312木虫 (正式写手)
“无冕之王”
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【求助/交流】求助：高手帮忙 已有2人参与
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本人是一实验新手，最近想将一空载体转到裂殖酵母里面，已经做了好几次了，没有一次成功的。有一次平板上长了有十几个菌落，但是摇菌的时候却没有摇起来，这一步做不出来下面的就没有办法做，急需高手指教，先谢了！下面是我的实验参考步骤： （1）划线复壮宿主菌后，挑1个单克隆菌落于10ml YE液体培养基中，150rpm，28℃振荡培养过夜。 （2）将培养的菌液按1％转接到100ml YE液体培养基中，振荡培养至OD600=0.6－0.8，取出置于冰上20min。 （3）将菌液装入灭菌的50ml离心管中，4℃ 4000g离心15min，回收菌体。 （4）菌体以10ml冰预冷的1.0M的山梨醇冲洗，在4℃ 4000g离心10min。 （5）反复3-4次。 （6）用3ml预冷的1.2M的山梨醇悬浮。 （7）每100μl分装后储存于4℃冰箱备用。 |
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2楼2010-08-15 11:00:47
gwd0312
木虫 (正式写手)
“无冕之王”
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