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【求助/交流】关于反向PCR 和测序结果的拼接 已有6人参与
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最近在做反向PCR·· 用的HaeIII酶切·· 弥散性条带 回收800-2000bp 的片段，纯化，用2ng/ul 的量进行自环化。。但是之后的反向PCR 除了第一次跑出来一个，后面一直跑不出啊。。。 我想问··· 如果反向PCR 的结果依然是弥散带，是不是可以反复调整下体系继续做呢？ 还是如果跑不出来就需要重新进行自环化？ 不知道大家反向的PCR 的成功率一般高么？ 有什么好的经验么？ 还有就是 反向PCR 测序的结果出来以后，应该如何拼接呢？ 如何找到片段的连接点？ 求高人赐教·· 不甚感激！ |
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linxi8579
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ben1147
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