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【求助/交流】关于DNA提取的问题。请高手赐教 已有9人参与
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请高手赐教以下问题。 我提DNA过程中，先后用裂解液、饱和酚、酚仿醇（25:24:1）、氯仿、酒精、75%酒精。最后用TE溶解。 此过程没有用RNase。 这个过程提取下来的DNA有RNA干扰，有蛋白残留。 请问如何将这个粗提的DNA纯化。 在哪里加RNase,加多少，如何一步步纯化。 请细告知。谢谢 |
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rosalie161
金虫 (正式写手)
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提取详细
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ffrc(金币+1):谢谢参与
ffrc(金币+10):非常详细。巨谢 2010-08-05 10:11:49
ffrc(金币+1):谢谢参与
ffrc(金币+10):非常详细。巨谢 2010-08-05 10:11:49
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（2） 将100ml培养液转移至离心管中，12000rpm离心5min，弃上清。 （3） 加入9.5mlTE悬浮沉淀，并加0.5ml10%SDS，50μl20mg/ml(或1mg干粉)蛋白酶K。混匀37℃保温1小时。 （4） 加1.5ml5mol/LNaCl，混匀。 （5） 加1.5mCTAB/NaCl溶液，混匀，65℃保温20分钟。 （6） 用等体积酚：氯仿：异戊醇（25：24：1）抽提，12000rpm离心10分钟，将上清液移至干净离心管。 （7） 用等体积异戊醇：氯仿（1：24）抽提，12000rmp离心10分钟，取上清液移至干净管中。 （8） 加入0.6-1倍体积异丙醇，-20℃静置30min. （9） 12000rpm离心10min弃上清。 （10）将沉淀悬浮于10ml超纯水中。 （11）加入RNase,37℃水浴30min. （12）加入等体积饱和酚/氯仿/异戊醇（25：24：1），上下颠倒数次混匀。 （13）12000rpm离心10min,吸取上相液体。 （14）加入等体积饱和氯仿/异戊醇（24：1），上下颠倒数次混匀。 （15）12000rpm离心10min,吸取上相液体。 （16）加入1/10体积3M NaAc，在加入2倍体积预冷的无水乙醇，-20℃放置30min. （17）12000rpm离心15min,弃上清，用70%的乙醇洗涤沉淀。 （18）自然风干后，加入1-2mlTE或者超纯水溶解DNA。 （19）紫外分光光度计测定OD235,OD260和OD280，以判定提取的基因组DNA的纯度和浓度。 |
9楼2010-08-05 09:12:37
2楼2010-08-04 22:25:00
hustxiong
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accident1256
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4楼2010-08-04 22:45:21
