24小时热门版块排行榜    

查看: 2003  |  回复: 13
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

ffrc

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于DNA提取的问题。请高手赐教 已有9人参与

请高手赐教以下问题。
我提DNA过程中,先后用裂解液、饱和酚、酚仿醇(25:24:1)、氯仿、酒精、75%酒精。最后用TE溶解。
此过程没有用RNase。
这个过程提取下来的DNA有RNA干扰,有蛋白残留。
请问如何将这个粗提的DNA纯化。
在哪里加RNase,加多少,如何一步步纯化。
请细告知。谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hustxiong

木虫 (正式写手)


ffrc(金币+1):谢谢参与
要看看 你用的是什么裂解液了,CTAB,SDS 等都是PCR抑制剂,彻底清除需要相应试剂的剂量把握,比如用醋酸钾除SDS。
建议  购买DNA纯化试剂盒,这样后续试验会顺利很多,国产的 一般不会太贵,效果都还不错。原理就是通过硅胶柱吸附后, 再洗脱。
3楼2010-08-04 22:38:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答

louli

铜虫 (小有名气)

★ ★ ★
ffrc(金币+1):谢谢参与
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-08-05 06:05:32
引用回帖:
Originally posted by ffrc at 2010-08-04 21:45:11:
请高手赐教以下问题。
我提DNA过程中,先后用裂解液、饱和酚、酚仿醇(25:24:1)、氯仿、酒精、75%酒精。最后用TE溶解。
此过程没有用RNase。
这个过程提取下来的DNA有RNA干扰,有蛋白残留。
请问如何将这个粗 ...

加完裂解液之后,水浴65°一个小时,降至室温,加入5微升的RNAse,如果蛋白含量高,加饱和酚抽提,然后加入等体积的氯仿异戊醇(24:1),离心,取上清,加十分之一体积的乙酸钠和等体积的异丙醇,离心10min。用76%的乙醇离心5min洗涤,再用70%的乙醇洗涤,晾干,一般用水溶解。
2楼2010-08-04 22:25:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

accident1256

铜虫 (小有名气)


ffrc(金币+1):谢谢参与
看试剂盒的说明书~~
人各有命~
4楼2010-08-04 22:45:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dorecnu

木虫 (正式写手)

回复


ffrc(金币+1):谢谢参与
RNA酶一般在裂解完成之后就加入,37摄氏度处理30分钟即可。有蛋白残留的话,多用酚氯仿抽提几次即可,另外,沉淀之前要加入3M的醋酸钠。
6楼2010-08-04 23:59:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 211本,11408一志愿中科院277分,曾在中科院自动化所实习 +3 Losir 2026-03-12 4/200 2026-03-16 21:52 by Losir
[考研] 药学383 求调剂 +3 药学chy 2026-03-15 4/200 2026-03-16 20:51 by 元子^0^
[考研] 085601求调剂 +3 Du.11 2026-03-16 3/150 2026-03-16 20:42 by 无际的草原
[考研] 考研化学学硕调剂,一志愿985 +3 张vvvv 2026-03-15 5/250 2026-03-16 20:25 by 张vvvv
[考研] 0703化学调剂 ,六级已过,有科研经历 +7 曦熙兮 2026-03-15 7/350 2026-03-16 16:34 by houyaoxu
[考研] 321求调剂 +5 大米饭! 2026-03-15 5/250 2026-03-16 16:33 by houyaoxu
[考研] 308求调剂 +3 是Lupa啊 2026-03-16 3/150 2026-03-16 10:07 by 求调剂zz
[考博] 东华理工大学化材专业26届硕士博士申请 +6 zlingli 2026-03-13 6/300 2026-03-15 20:00 by ryzcf
[考研] 289求调剂 +5 步川酷紫123 2026-03-11 5/250 2026-03-15 00:45 by kruisytel
[考研] 复试调剂 +4 z1z2z3879 2026-03-14 5/250 2026-03-14 16:30 by JourneyLucky
[考研] 0856材料与化工309分求调剂 +6 ZyZy…… 2026-03-10 6/300 2026-03-14 00:38 by JourneyLucky
[考研] 327求调剂 +4 Ffff03 2026-03-10 4/200 2026-03-14 00:17 by JourneyLucky
[考研] 材料专硕288分求调剂 一志愿211 +4 在家想你 2026-03-11 4/200 2026-03-13 22:49 by JourneyLucky
[考研] 329求调剂 +3 miaodesi 2026-03-12 4/200 2026-03-13 20:53 by 18595523086
[考研] 材料与化工085600调剂求老师收留 +9 jiaanl 2026-03-11 9/450 2026-03-13 20:22 by JourneyLucky
[考研] 293求调剂 +3 世界首富 2026-03-11 3/150 2026-03-13 16:27 by JourneyLucky
[考研] 考研调剂 +4 芬达46 2026-03-12 4/200 2026-03-13 16:04 by ruiyingmiao
[考研] 290求调剂 +3 ADT 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:19 by peike
[考博] 读博申请 +5 感dd 2026-03-10 7/350 2026-03-11 17:02 by QGZDSYS
[考研] 收调剂 +7 调剂的考研学生 2026-03-10 7/350 2026-03-10 17:57 by 麦茶汤圆
信息提示
请填处理意见