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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于DNA提取的问题。请高手赐教
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ffrc

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于DNA提取的问题。请高手赐教 已有9人参与

请高手赐教以下问题。
我提DNA过程中，先后用裂解液、饱和酚、酚仿醇（25:24:1）、氯仿、酒精、75%酒精。最后用TE溶解。
此过程没有用RNase。
这个过程提取下来的DNA有RNA干扰，有蛋白残留。
请问如何将这个粗提的DNA纯化。
在哪里加RNase,加多少，如何一步步纯化。
请细告知。谢谢
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1楼 2010-08-04 21:45:11
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dorecnu

木虫 (正式写手)

回复

★
ffrc(金币+1):谢谢参与
RNA酶一般在裂解完成之后就加入，37摄氏度处理30分钟即可。有蛋白残留的话，多用酚氯仿抽提几次即可，另外，沉淀之前要加入3M的醋酸钠。
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6楼2010-08-04 23:59:11
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louli

铜虫 (小有名气)
★ ★ ★
ffrc(金币+1):谢谢参与
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-08-05 06:05:32
引用回帖:
Originally posted by ffrc at 2010-08-04 21:45:11:
请高手赐教以下问题。
我提DNA过程中，先后用裂解液、饱和酚、酚仿醇（25:24:1）、氯仿、酒精、75%酒精。最后用TE溶解。
此过程没有用RNase。
这个过程提取下来的DNA有RNA干扰，有蛋白残留。
请问如何将这个粗 ...

加完裂解液之后，水浴65°一个小时，降至室温，加入5微升的RNAse，如果蛋白含量高，加饱和酚抽提，然后加入等体积的氯仿异戊醇（24：1），离心，取上清，加十分之一体积的乙酸钠和等体积的异丙醇，离心10min。用76%的乙醇离心5min洗涤，再用70%的乙醇洗涤，晾干，一般用水溶解。
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2楼2010-08-04 22:25:00
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hustxiong

木虫 (正式写手)
★
ffrc(金币+1):谢谢参与
要看看 你用的是什么裂解液了，CTAB,SDS 等都是PCR抑制剂，彻底清除需要相应试剂的剂量把握，比如用醋酸钾除SDS。
建议  购买DNA纯化试剂盒，这样后续试验会顺利很多，国产的 一般不会太贵，效果都还不错。原理就是通过硅胶柱吸附后， 再洗脱。
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3楼2010-08-04 22:38:43
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accident1256

铜虫 (小有名气)
★
ffrc(金币+1):谢谢参与
看试剂盒的说明书~~
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人各有命~
4楼2010-08-04 22:45:21
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