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kobexiayi

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】电泳图谱 已有7人参与

大家好,我今天PCR后跑电泳,发现引物二聚体和我的目的片段长度差不多,基本分不开,我现在还不能确定自己是否已经P出了自己的目的条带。请问要怎么才能将引物二聚体和目的条带区分开来啊?谢谢
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wuer413023

至尊木虫 (文坛精英)

没事领金币


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1降低引物用量,减小引物二聚体清晰度
2做个pcr梯度,观察那条条带较好



怀疑中:你的目的条带也太小了吧,引物二聚体一般在marker最下方

希望有帮助
上邪!我欲与君相知,长命无绝衰。山无陵,江水为竭,冬雷震震,夏雨雪,天地合,乃敢与君绝!
2楼2010-08-04 16:19:45
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kobexiayi

新虫 (初入文坛)

我的目的条带是100bp的,用于做荧光PCR的
3楼2010-08-04 16:26:39
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
荧光PCR对引物的要求不是很高吗?最好不要有引物二聚体吧。
不是很懂的说。
Thank-you,so-blue.
4楼2010-08-04 17:14:48
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zzw1221

木虫 (著名写手)


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估计你要重新设计引物,荧光pcr 还是要特异性比较好,才好
5楼2010-08-04 17:34:56
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yujiaping1

木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
reasonspare(金币+1):谢谢分享。 2010-08-05 06:05:01
定量PCR一般是探针法扩增片段在50-150bp,探针法是不需要将两条带分开的,因为探针可以特异的识别目的条带
6楼2010-08-04 18:16:05
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kobexiayi

新虫 (初入文坛)

不好意思,我上面说的引物二聚体是阴性对照中出现的条带,与我加模板管扩增的条带在同一水平线上了,所以不确定有模板管扩出来的条带是目的片段还是引物二聚体了?求教如何确认我的PCR是成功的,确实是目的条带?
7楼2010-08-04 23:48:02
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kobexiayi

新虫 (初入文坛)

不好意思,我上面说的引物二聚体是阴性对照中出现的条带,与我加模板管扩增的条带在同一水平线上了,所以不确定有模板管扩出来的条带是目的片段还是引物二聚体了?求教如何确认我的PCR是成功的,确实是目的条带?
8楼2010-08-04 23:48:13
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steamsn

金虫 (小有名气)


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基本上你跑电泳是分不开,你可以看看NC与目标条带的亮度强弱,一般目标条带的亮度要强一些.另外建议,如果你做荧光的话,可以将目标片断长度定在120~200 bp之间,虽然要求是50~150 bp,但是如果你想要电泳图的话,最好长一些.
我命由我不由天
9楼2010-08-05 07:43:21
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195251071

新虫 (初入文坛)


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用2%的胶跑得开的。你可以试试。
10楼2010-08-05 10:27:31
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