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木虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】这种实验是直接提DNA呢还是提RNA再逆转录已有2人参与

实验方案是这样的：
先分离病人和治愈后人的T淋巴细胞，提RNA，逆转录，用20对引物进行PCR，然后跑变性聚丙烯酰铵凝胶电泳，观察病人和治愈后人的基因图谱差异。
我想问的是提RNA那步可不可以直接提DNA？
还有就是PAGE条带回收大家都用的什么方法？

1楼 2010-04-25 17:00:22

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金虫 (正式写手)

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amisking(金币+2): 2010-04-25 18:32

我觉得还是得提取RNA,毕竟mRNA才真正是蛋白质翻译的模板，只要其翻译的蛋白质正常就证明病愈了。而提DNA则意义不如提取RNA大，因为真核生物DNA含有内含子，其序列的变化，对形成正常蛋白质作用不是太大。
回收用试剂盒就行了

2楼2010-04-25 17:52:33

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木虫 (正式写手)

在通往变态的坦途上

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amisking(金币+3): 2010-04-25 18:32

当然不能直接提DNA了
你得明白这是不同层次上的调控啊
生病之后或治愈可能有某些基因活跃转录翻译或关闭了转录
你直接提DNA对比差异那么这个实验还有什么存在的意义

终于熬成木虫了……

3楼2010-04-25 17:54:51

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