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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】电泳图谱
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kobexiayi

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】电泳图谱 已有7人参与

大家好，我今天PCR后跑电泳，发现引物二聚体和我的目的片段长度差不多，基本分不开，我现在还不能确定自己是否已经P出了自己的目的条带。请问要怎么才能将引物二聚体和目的条带区分开来啊?谢谢
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1楼 2010-08-04 16:01:18
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wuer413023

至尊木虫 (文坛精英)

没事领金币
★
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1降低引物用量，减小引物二聚体清晰度
2做个pcr梯度，观察那条条带较好



怀疑中：你的目的条带也太小了吧，引物二聚体一般在marker最下方

希望有帮助
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上邪!我欲与君相知，长命无绝衰。山无陵，江水为竭，冬雷震震，夏雨雪，天地合，乃敢与君绝！
2楼2010-08-04 16:19:45
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kobexiayi

新虫 (初入文坛)
我的目的条带是100bp的，用于做荧光PCR的
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3楼2010-08-04 16:26:39
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
荧光PCR对引物的要求不是很高吗？最好不要有引物二聚体吧。
不是很懂的说。
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Thank-you，so-blue.
4楼2010-08-04 17:14:48
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zzw1221

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
估计你要重新设计引物，荧光pcr 还是要特异性比较好，才好
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5楼2010-08-04 17:34:56
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★ ★
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reasonspare(金币+1):谢谢分享。 2010-08-05 06:05:01
定量PCR一般是探针法扩增片段在50-150bp，探针法是不需要将两条带分开的，因为探针可以特异的识别目的条带
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6楼2010-08-04 18:16:05
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kobexiayi

新虫 (初入文坛)
不好意思，我上面说的引物二聚体是阴性对照中出现的条带，与我加模板管扩增的条带在同一水平线上了，所以不确定有模板管扩出来的条带是目的片段还是引物二聚体了？求教如何确认我的PCR是成功的，确实是目的条带？
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7楼2010-08-04 23:48:02
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kobexiayi

新虫 (初入文坛)
不好意思，我上面说的引物二聚体是阴性对照中出现的条带，与我加模板管扩增的条带在同一水平线上了，所以不确定有模板管扩出来的条带是目的片段还是引物二聚体了？求教如何确认我的PCR是成功的，确实是目的条带？
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8楼2010-08-04 23:48:13
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steamsn

金虫 (小有名气)
★
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基本上你跑电泳是分不开,你可以看看NC与目标条带的亮度强弱,一般目标条带的亮度要强一些.另外建议,如果你做荧光的话,可以将目标片断长度定在120~200 bp之间,虽然要求是50~150 bp,但是如果你想要电泳图的话,最好长一些.
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我命由我不由天
9楼2010-08-05 07:43:21
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195251071

新虫 (初入文坛)
★
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用2%的胶跑得开的。你可以试试。
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10楼2010-08-05 10:27:31
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