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xulu2008

金虫 (正式写手)

[交流] 【问题反馈】一对引物扩出来的产物测序后竟然是很多质粒的PCR产物,再怎么区分呢? 已有8人参与

一对引物扩出来的产物测序后竟然是很多质粒的PCR产物,再怎么区分呢?怎么样才能找到我需要的质粒的特异的地方,望各位高手指教,小弟在此谢过了!!!
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sqhnsd

金虫 (正式写手)


reasonspare(金币+1):谢谢分享。 2010-08-05 06:02:18
很简单,把你的质粒重新转化e.coli,然后挑单克隆,菌落PCR,将只有单一条带的聚落摇菌提质粒测序
5楼2010-08-04 12:31:04
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louli

铜虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-08-05 06:01:53
你的意思是不是扩出来的序列与很多的载体在相似序列啊,那是很正常的,因为你的目的片段是连在载体上的 ,测序的时候必然要多测一些。 你P的是已知序列吗,如果是已知序列,你可以直接在NCBI上把两个序列一起比对就行了,这样比较准确。
2楼2010-08-04 06:55:48
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liouwzh

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
可能是连接的时候出现了假阳性。
3楼2010-08-04 09:26:46
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cpu2004

金虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-08-05 06:02:10
说的不是很清楚,难道是直接测的PCR产物?正常转化挑菌每个菌落应该是单克隆的。不管怎么说首先要注意的是你的引物扩增的特异性问题,最起码你应该是琼脂糖电泳是单一条带,还有的问题要看你到底是啥目的和具体方案了
4楼2010-08-04 11:17:55
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