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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR产物切胶回收后可不可以加A尾,做TA克隆，急！希望高手们能帮帮忙！
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Illfxy

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】PCR产物切胶回收后可不可以加A尾,做TA克隆，急！希望高手们能帮帮忙！ 已有9人参与

小弟刚开始做分子，在做TA克隆，可是PCR出来有杂带，不能直接做连接，想做一个切胶回收，但是又担心回收的DNA脱掉了A尾巴，想问一下有没有可以回收后加尾的方法？万分感谢解答的高手！
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1楼 2010-08-02 23:33:56
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xiangao

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-08-03 05:52:12
a是加到了PCR产物末端  怎么会丢掉呢？TA克隆取决于你PCR用的酶，比如Taq可以加A, Pfu不能加A
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2楼2010-08-03 00:10:30
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
多虑了不会的，降解没那么快的
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几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
3楼2010-08-03 00:15:27
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xiaoru2010

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
A是在你需要的带里，跟杂带有啥关系，回收是必须的
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4楼2010-08-03 08:17:30
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):感谢交流~~ 2010-08-03 09:19:53
可以回收

不放心可以加A尾
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5楼2010-08-03 08:18:50
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liouwzh

木虫 (正式写手)
割胶回收一般不会是PCR产物脱掉A尾的，如果不放心可以用taq酶加入dNTP，72度再延伸10min。
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6楼2010-08-03 09:32:25
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
放心，你刀法没那么精准，一刀切掉A尾巴还是很有难度的。
PS：你咋不担心会将片段切两半呢？
开玩笑的。
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Thank-you，so-blue.
7楼2010-08-03 16:28:34
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天空2011

铜虫 (小有名气)
考虑的太多了
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8楼2013-03-05 09:32:10
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beer胖

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
A不会丢的，直接胶回收做克隆就行。
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9楼2013-03-07 21:49:15
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风尤溪渐

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by liouwzh at 2010-08-03 09:32:25
割胶回收一般不会是PCR产物脱掉A尾的，如果不放心可以用taq酶加入dNTP，72度再延伸10min。

在胶回收产物里加taq、dntp重新加A尾后 要纯化一下吗  还是就直接连接
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10楼2015-12-21 11:42:09
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