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Illfxy

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】PCR产物切胶回收后可不可以加A尾,做TA克隆,急!希望高手们能帮帮忙! 已有9人参与

小弟刚开始做分子,在做TA克隆,可是PCR出来有杂带,不能直接做连接,想做一个切胶回收,但是又担心回收的DNA脱掉了A尾巴,想问一下有没有可以回收后加尾的方法?万分感谢解答的高手!
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风尤溪渐

铁虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by liouwzh at 2010-08-03 09:32:25
割胶回收一般不会是PCR产物脱掉A尾的,如果不放心可以用taq酶加入dNTP,72度再延伸10min。

在胶回收产物里加taq、dntp重新加A尾后 要纯化一下吗  还是就直接连接
10楼2015-12-21 11:42:09
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xiangao

金虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-08-03 05:52:12
a是加到了PCR产物末端  怎么会丢掉呢?TA克隆取决于你PCR用的酶,比如Taq可以加A, Pfu不能加A
2楼2010-08-03 00:10:30
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
多虑了不会的,降解没那么快的
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
3楼2010-08-03 00:15:27
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xiaoru2010


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
A是在你需要的带里,跟杂带有啥关系,回收是必须的
4楼2010-08-03 08:17:30
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