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gdongli8325

铁杆木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】胶回收后产物可以做PCR吗? 已有7人参与

因为PCR产物不是很特异(大小比较接近),而且得不到特异带,所以就进行了胶回收,但是想知道回收的条带是不是想要的条带。可不可以将胶回收产物再进行一次PCR扩增?如果可以的话,用多大浓度的胶回收产物?
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

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优秀版主

★ ★ ★
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看天(金币+2):鼓励交流 2010-07-31 18:09:50
当然可以了,不过最好还是pfu产物做 模板,否则二次PCR的效果很不好

所以推荐用高保真酶,

taq则需要足够的稀释,而且还得看看运气
5楼2010-07-31 10:53:02
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louli

铜虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-07-31 09:23:52
你知道你的目的带是多大的吗,切胶的时候对照marker切i,回收之后跑个胶就可以了,看看是不是你的带。我们回收胶都是用1%的琼脂胶
2楼2010-07-31 07:50:09
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-07-31 09:24:03
可以
胶回收的产物一般稀释一下之后再扩,10~100倍都可以,根据原始条带的量以及回收率确定吧
PCR很灵敏,一点点模板就能做出来
3楼2010-07-31 09:08:15
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刘小乐

铜虫 (小有名气)

用试剂盒回收之后,用先前用的引物再P一次就行了
互动互利互相学习
4楼2010-07-31 10:24:14
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