应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】5'-RACE求助
51/1返回列表
查看: 2586  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

lianyi1989

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】5'-RACE求助 已有2人参与

最近一直在做RACE，3'还比较幸运，一次就OK了，但是5'做了近一月了，还是不行。用的是clontech的SMARTer，已经设计了三四条引物了，基本上都是弥散，做了两个巢式，也是弥散...RNA的18s要比28s亮些，但是完整性还不错，有没可能是5'接头没接上呢？引物感觉设计的还可以的，基本上都符合说明书上的要求，PCR体系和程序都是用的说明书上推荐的，现在真是不知道该再怎么做了，请各位虫友帮忙分析一下，不胜感激了！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-07-26 21:01:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

suguolian

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by yujiaping1 at 2010-07-26 21:16:44
提醒几个小地方，如果都注意到了，应该没有问题。
1、单独添加SMARTer II A Oligonucleotide是5RACE不同于3RACE的地方
2、引物设计的模板链是和3RACE互补的那条链
3、如果基因丰度低的，5RACE会比3RACE难做一些， ...

请问提取完总RNA可以先合成cDNA第一链保存-20冰箱，一星期再用可以吗？我的5‘引物哈i没合成，但是要先做3’的，提取了RNA怕放久了会降解。请大侠指导……
赞一下 回复此楼
9楼2013-10-02 13:47:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

yujiaping1

木虫 (著名写手)
lianyi1989(金币+1): 2010-07-26 21:22:00
提醒几个小地方，如果都注意到了，应该没有问题。
1、单独添加SMARTer II A Oligonucleotide是5RACE不同于3RACE的地方
2、引物设计的模板链是和3RACE互补的那条链
3、如果基因丰度低的，5RACE会比3RACE难做一些，一般需要做巢式PCR，注意巢式PCR使用NUP引物，效果比UPM好。也可以在目的条带处切胶（指条带浅或者弥散状态），做二次PCR

另外，四条引物，应该有六个巢式PCR，建议你都做一下，我做的RACE，巢式的结果都相当的理想。
赞一下 回复此楼
2楼2010-07-26 21:16:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lianyi1989

金虫 (小有名气)
谢谢你的回复！前两点应该都注意到了，关于第三点巢式引物的，两条引物可以有重叠吗？还有，巢式pcr的话第一轮应该还是用UPM吧，第二轮用NUP，是么？
赞一下 回复此楼
3楼2010-07-26 21:28:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)
lianyi1989(金币+1): 2010-07-27 10:37:22
引用回帖:
Originally posted by lianyi1989 at 2010-07-26 21:28:24:
谢谢你的回复！前两点应该都注意到了，关于第三点巢式引物的，两条引物可以有重叠吗？还有，巢式pcr的话第一轮应该还是用UPM吧，第二轮用NUP，是么？

是第二轮用NUP。
两个引物有重叠也没有问题的，NUP就是个有重叠的巢式引物，对吧
赞一下 回复此楼
4楼2010-07-26 21:58:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 资源与环境 调剂申请(333分) +5 holy J 2026-03-21 5/250 2026-03-21 22:42 by Catalysis25
[考研] 280求调剂 +11 咕噜晓晓 2026-03-18 12/600 2026-03-21 22:40 by ACS Nano——
[考研] 化学工程321分求调剂 +18 大米饭！ 2026-03-15 22/1100 2026-03-21 20:20 by HH领袖
[考研] 0703化学调剂 +4 妮妮ninicgb 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:39 by 学员8dgXkO
[考研] 【考研调剂】化学专业 281分，一志愿四川大学，诚心求调剂 +11 吃吃吃才有意义 2026-03-19 11/550 2026-03-21 18:23 by 学员8dgXkO
[考研] 求助 +5 梦里的无言 2026-03-21 6/300 2026-03-21 17:51 by 学员8dgXkO
[考研] 南昌大学材料专硕311分求调剂 +6 77chaselx 2026-03-20 6/300 2026-03-21 07:24 by JourneyLucky
[考研] 一志愿中国石油大学（华东） 本科齐鲁工业大学 +3 石能伟 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:22 by JourneyLucky
[考研] 296求调剂 +6 www_q 2026-03-18 10/500 2026-03-20 23:56 by JourneyLucky
[考研] 一志愿南京理工大学085701资源与环境302分求调剂 +4 葵梓卫队 2026-03-18 6/300 2026-03-20 23:02 by JourneyLucky
[考研] 一志愿武汉理工材料工程专硕调剂 +9 Doleres 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:36 by JourneyLucky
[考研] 085600材料与化工 +8 安全上岸！ 2026-03-16 8/400 2026-03-20 22:13 by luoyongfeng
[考研] 药学383 求调剂 +3 药学chy 2026-03-15 5/250 2026-03-20 22:11 by 云游重阳
[考研] 材料学硕297已过四六级求调剂推荐 +11 adaie 2026-03-19 11/550 2026-03-20 21:30 by laoshidan
[论文投稿] 申请回稿延期一个月，编辑同意了。但系统上的时间没变，给编辑又写邮件了，没回复 10+3 wangf9518 2026-03-17 4/200 2026-03-19 23:55 by babero
[考研] 320求调剂0856 +3 不想起名字112 2026-03-19 3/150 2026-03-19 22:53 by 学员8dgXkO
[考研] 材料与化工求调剂 +7 为学666 2026-03-16 7/350 2026-03-19 14:48 by 尽舜尧1
[考研] 085600材料与化工求调剂 +6 绪幸与子 2026-03-17 6/300 2026-03-19 13:27 by houyaoxu
[考研] 考研求调剂 +3 橘颂. 2026-03-17 4/200 2026-03-17 21:43 by 有只狸奴
[考研] 318求调剂 +3 Yanyali 2026-03-15 3/150 2026-03-16 16:41 by houyaoxu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭