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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】SDS-PAGE凝胶电泳
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黎亚丽

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】SDS-PAGE凝胶电泳 已有13人参与

SDS-PAGE凝胶电泳每一步骤的作用是什么？比如：每隔几小时取出的菌体，离心，沉淀用2倍的SDS-PAGE缓冲液悬浮（意义？），煮沸（作用？）离心，取上清上样，为什么不取沉淀？为什么悬浮后不直接离心？
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1楼 2010-07-26 18:33:06
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zhchch007

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
24楼2010-07-28 14:06:35
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普通回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
呃……我觉得你还是去多想想实验的原理吧……
或者站在细菌的角度考虑，这么干会有什么影响
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2楼2010-07-26 18:50:48
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黄大牛

铜虫 (初入文坛)
虾米意思
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朝为田舍郎，暮登天子堂。将相本无种，男儿当自强。
3楼2010-07-26 19:09:40
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烟大考研

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
ATP说的对……你们是不是想测总的蛋白表达量，连细胞内的也一起算上，如果不是这样的话，你们先悬浮，煮沸后离心，这一步就不太正确
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心信其可行，则移山填海之难，终有成功之日；心信其不可行，则反掌折枝之易，亦无收效之期
4楼2010-07-26 19:15:38
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花花贝

金虫 (知名作家)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2):最近很活跃。 2010-07-26 20:50:46
每隔几小时 是不是诱导时间长短
蛋白有可能是分泌到细胞外的 就要取上清  也可能在内部 就要裂解
悬浮的缓冲液没什么意义 该怎么加就怎么加
煮沸是不是要变性蛋白质
我也是新手哈哈

[ Last edited by 花花贝 on 2010-7-26 at 19:59 ]
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5楼2010-07-26 19:58:02
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黎亚丽

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-07-26 18:50:48:
呃……我觉得你还是去多想想实验的原理吧……
或者站在细菌的角度考虑，这么干会有什么影响

实验原理就是不加TPTG就不表达外源基因，家了TPTG就可以表达了。但是你也得知道每一步实验的目的吧！
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6楼2010-07-27 16:10:43
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黎亚丽

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 烟大考研 at 2010-07-26 19:15:38:
ATP说的对……你们是不是想测总的蛋白表达量，连细胞内的也一起算上，如果不是这样的话，你们先悬浮，煮沸后离心，这一步就不太正确

我就是想测一下我的目的基因表达蛋白了没？
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7楼2010-07-27 16:13:34
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
IPTG路过~~~
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8楼2010-07-27 18:50:14
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
我说的实验原理包括跑PAGE，包括怎么获取蛋白质
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9楼2010-07-27 18:51:29
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黎亚丽

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-07-27 18:51:29:
我说的实验原理包括跑PAGE，包括怎么获取蛋白质

那我得向你多请教请教芽！
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10楼2010-07-27 19:55:13
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